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《12 免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、BioWiseTechCo.,LTD.AdvCell?免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基AdvCell?免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（BICBM0001）的核心是采用無血清替代物為細(xì)胞提供一個(gè)營養(yǎng)全面和平衡的環(huán)境。產(chǎn)品適用于人及哺乳類動(dòng)物免疫細(xì)胞的培養(yǎng),包括T、DC﹑CIK、NK等細(xì)胞的研究及應(yīng)用。通過添加不同的細(xì)胞刺激因子，可高效快速擴(kuò)增相應(yīng)的免疫細(xì)胞。★產(chǎn)品號(hào)CatNo:BICSFM0001★產(chǎn)品組成名稱產(chǎn)品號(hào)規(guī)格儲(chǔ)藏條件運(yùn)輸AdvCell?免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基AdvCell?ImmuneCellBaseMediumBICBM0001500ml2-8℃避光冰袋/常溫AdvCell?免
2、疫細(xì)胞添加物AAdvCell?ImmuneCellCultureSupplementABICS0001A20ml-20℃避光干冰AdvCell?免疫細(xì)胞添加物BAdvCell?ImmuneCellCultureSupplementBBICS0001B1ml-20℃避光干冰★產(chǎn)品適用范圍適用于人及哺乳類來源的免疫細(xì)胞包括T、DC、CIK、NK細(xì)胞的培養(yǎng)。★培養(yǎng)條件37℃，5％CO2無菌恒溫培養(yǎng)?！锊僮鞑襟E以下過程作為常規(guī)免疫細(xì)胞培養(yǎng)的一般準(zhǔn)則，如需在生物反應(yīng)器或培養(yǎng)袋中高密度培養(yǎng)，應(yīng)優(yōu)化條件來確定最佳的操作步驟，BICSFM0001中各組分（BICBM0001、BI
3、CS0001A、BICS0001B）在使用前37℃解凍之后混合。www.biotowntek.com4BioWiseTechCo.,LTD.【T細(xì)胞培養(yǎng)】1.準(zhǔn)備新鮮的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），或根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的外周血單個(gè)核細(xì)胞解凍程序，在37℃的水浴，快速解凍（〈1分鐘）凍存的外周血單個(gè)核細(xì)胞。2.用生理鹽水洗滌細(xì)胞，根據(jù)需要也可加入2-5％熱滅活的人自體血漿。3.用電子（即Coulter計(jì)數(shù)器，VI-細(xì)胞）或手動(dòng)的方法（即血球計(jì)數(shù)儀）給細(xì)胞計(jì)數(shù)。4.離心細(xì)胞，清除洗滌緩沖液。5.加入用AdvCell?免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）培養(yǎng)，培養(yǎng)初期，用含細(xì)
4、胞因子（如IL-2）的培養(yǎng)基重懸PBMC，CD3+T細(xì)胞密度保持在大約0.5-1×106/ml，轉(zhuǎn)移細(xì)胞到相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)容器（培養(yǎng)袋、培養(yǎng)瓶）。隨后可應(yīng)用各種操作激活T細(xì)胞，包括添加刺激的抗體或抗原呈遞細(xì)胞。無論培養(yǎng)T細(xì)胞的規(guī)模大小，細(xì)胞均可被隔離，激活和擴(kuò)大。6.在37℃，5％CO2的潮濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，給予并維持細(xì)胞在對(duì)數(shù)期生長所需要的營養(yǎng)。為了保持細(xì)胞在對(duì)數(shù)期的增長，當(dāng)細(xì)胞密度超過1×106/ml時(shí)，需要分離傳代，維持細(xì)胞密度在0.5-1×106/ml（例如，2×106個(gè)細(xì)胞/ml以上，按1：4比例0.5×106細(xì)胞/ml）。在靜態(tài)平板培養(yǎng)中為了獲得最佳的
5、氣體交換，建議培養(yǎng)基深度不超過1到1.2cm?！締魏思?xì)胞樹突狀細(xì)胞﹙DC﹚培養(yǎng)】1.準(zhǔn)備新鮮的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。2.將外周血單個(gè)核細(xì)胞鋪在培養(yǎng)瓶中，加入適量AdvCell?免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）。3.在37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育2-3小時(shí)。4.棄掉含非貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基。5.用生理鹽水洗滌貼壁細(xì)胞（主要是CD14+單核細(xì)胞）三次。6.添加重組人IL-4和重組人GM-CSF到AdvCell?免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001），至終濃度分別為50～100ng/ml和50ng/ml，并以此培養(yǎng)基培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。保持細(xì)胞度在1～3
6、×105細(xì)胞/cm2之間。研究者可視情況加入滅活的人自體血漿。7.在37℃，5%CO2的潮濕培養(yǎng)箱中連續(xù)孵育5天，建議培養(yǎng)3天左右已添加了IL-4和GM-CSF的AdvCell?免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）換液，換液過程保留貼壁和不貼壁的所有細(xì)胞。8.培養(yǎng)6天之后，細(xì)胞表現(xiàn)出典型的樹突狀細(xì)胞的形態(tài)和表面標(biāo)記（細(xì)胞CD1a、CD80、CD86、HLA-DR）。9.向AdvCell?免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）中添加1ng/ml的LPS或者50ng/ml的TNF-α誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞的成熟。www.biotowntek.com4BioWiseTe
7、chCo.,LTD.【CIK細(xì)胞培養(yǎng)】1.將采集的外周血收集到2支離心管中，2000rpm/min離心5min，棄上清，將沉淀細(xì)胞混合，到加生理鹽水至25mL，使沉淀細(xì)胞充分懸浮。另取1支離心管，加入淋巴細(xì)胞分離液20mL，用滴管將血細(xì)胞懸液緩慢轉(zhuǎn)移至淋巴細(xì)胞分離液的表面，使二者之間形成清晰的界面。2.2000rpm/min離心20min后，從管底到液面分為4層，依次為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞層、淋巴細(xì)胞分離液層、外周血單個(gè)核細(xì)胞層（PBMC層）、血漿層。用吸管將PBMC層吸出，轉(zhuǎn)移至另一支離心管中。3.加生理鹽水至40mL，1500rpm/min離心5min，結(jié)束后棄上清
8、，將沉淀細(xì)
