資源描述:
《黃酮類化合物分離方法研究進(jìn)展》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、黃酮類化合物分離方法研究進(jìn)展摘?要:綜述了黃酮類化合物分離方法研究進(jìn)展,為黃酮類化合物研究提供參考。關(guān)鍵詞:黃酮類化合物;分離。黃酮類化合物屬于植物次級(jí)代謝產(chǎn)物,廣泛存在于維管植物中,到目前為止已發(fā)現(xiàn)5000多種植物中含有黃酮類化合物[1]。黃酮類化合物分為許多不同類型,包括黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇、異黃酮、二氫異黃酮、查爾酮等化合物[2]。黃酮類化合物具有降低血管脆性及異常的通透性、降血脂、降血壓、抑制血小板聚集及血栓形成、抗肝臟病毒、抗炎、抗菌、解栓[3]抗氧化、清除自由基、抗衰老[4]
2、、抗癌、防癌[5]、降血糖[6]、鎮(zhèn)痛、免疫[7]等生理活性。這些生理活性引起了人們的高度重視,對(duì)該類化合物的研究已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界研究的熱門課題。由于黃酮類化合物在人體內(nèi)不能直接合成,只能從食物中獲得[8],所以近年來(lái)科學(xué)家都積極關(guān)注從植物體中分離純度高、活性強(qiáng)的黃酮類化合物,因此對(duì)黃酮類化合物分離方法的研究具有重要意義。由于黃酮化合物的性質(zhì)不同,其分離原理有:(1)極性大小不同,利用吸附能力或分配原理進(jìn)行分離;(2)酸性強(qiáng)弱不同,利用pH梯度萃取進(jìn)行分離;(3)分子大小不同,利用葡聚糖凝膠分子篩進(jìn)
3、行分離;(4)分子中某些特殊結(jié)構(gòu),利用與金屬鹽絡(luò)合能力的不同進(jìn)行分離[9]。1.pH梯度萃取黃酮類化合物中有酚羥基的取代而顯酸性,由于羥基的數(shù)目和位置不同,酸性強(qiáng)弱也不同,利用這一特性,將植物提取的總黃酮溶于有機(jī)溶劑中,依次按弱堿至強(qiáng)堿,從稀堿至濃堿水溶液的順序進(jìn)行萃取,就可以將黃酮按較強(qiáng)酸性至較弱酸性的順序分別萃取出來(lái)。如將混合物溶于有機(jī)溶劑(如乙醚),依次用5%碳酸氫鈉(萃取7,4’-二羥基黃酮)、5%的碳酸鈉(萃取7-羥基黃酮或4’-2羥基黃酮)、0.2%氫氧化鈉(萃取一般酚羥基黃酮)、4%氫氧
4、化鈉(萃取5-羥基黃酮)萃取而使其分離[10]。2.柱色譜法2.1硅膠柱層析法。由于黃酮類化合物與硅膠有很強(qiáng)的吸附能力,難洗脫,而且與硅膠中很多金屬離子絡(luò)合而不能被洗脫,所以應(yīng)預(yù)先用濃鹽酸處理硅膠除去金屬離子,以免干擾分離效果。硅膠柱層析主要用于分離極性較低的黃酮類化合物如異黃酮、黃烷類、二氫黃酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黃酮和黃酮醇,硅膠在降活后也可用于分離極性較大的黃酮類化合物,如甙類、多羥基黃酮類化合物[11]。杜欣等利用硅膠柱色譜法從毛泡桐花中分離獲得5種黃酮類化合物[12]。2.2聚酰胺柱
5、層析法。聚酰胺是較為理想的吸附劑,適于在制備分離工藝中應(yīng)用。其吸附強(qiáng)度主要取決于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目、位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。但洗脫速度慢,死吸附較大,損失較高[13]。徐美奕等利用聚酰胺樹脂柱層析,采用水和乙醇梯度洗脫,從紫荊花中分離出蘆丁、槲皮素、山柰酚3種黃酮甙元[14]。2.3葡聚糖凝膠柱層析法。黃酮類化合物的分離,主要使用兩種型號(hào)的葡聚糖凝膠:SephadexG型和SephadexLH-20型。其原理主要是吸附作用。凝膠對(duì)黃酮類化合物的吸附程度取
6、決于游離羥基的數(shù)目,但分離黃酮苷時(shí),分子篩的性質(zhì)起主導(dǎo)作用。在洗脫時(shí),黃酮苷類大體上是按相對(duì)分子質(zhì)量由大到小的順序流出柱體,分子量越大,連的糖基越多,越易洗脫[11]。周惠燕等聯(lián)用SephadexLH-20和HPLC分離制備麥黃酮,效果良好[15]。2.4環(huán)糊精鍵合凝膠柱層析法。β環(huán)糊精是一種同時(shí)具有多羥基外周和疏水空腔的圓筒形分子,這樣的結(jié)構(gòu)賦予其既能和目標(biāo)產(chǎn)物發(fā)生氫鍵作用,又能與其產(chǎn)生疏水作用的能力,同時(shí),黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)一般包括疏水性的母核和其他親水性的側(cè)鏈基團(tuán)(如糖苷和羥基等)。因此,黃酮類
7、化合物能夠與環(huán)糊精配基同時(shí)發(fā)生氫鍵作用和疏水作用,從而為色譜分離過(guò)程提供保留力。譚天偉等利用環(huán)糊精鍵合凝膠介質(zhì)分離純化葛根素、表沒(méi)食子兒茶素以及槲皮素、山奈酚和異鼠李素,效果良好[16]。3.薄層色譜法(thinlayerchromatography,TLC)薄層色譜是一種快速、簡(jiǎn)便、高效、經(jīng)濟(jì)、應(yīng)用廣泛的色譜分析方法。薄層色譜的特點(diǎn)是可以同時(shí)分離多個(gè)樣品,分析成本低,對(duì)樣品預(yù)處理要求低,對(duì)固定相、展開劑的選擇自由度大,適用于含有不易從分離介質(zhì)脫附或含有懸浮微?;蛐枰笱苌幚淼臉悠贩治觥3R?guī)的薄層
8、色譜法存在展開時(shí)間長(zhǎng)、展開劑體積需求大和分離結(jié)果差等缺點(diǎn)[17]。離心薄層層析(CTLC)具有分離速度快、處理量大等優(yōu)點(diǎn),可以替代制備型薄層色譜,有時(shí)甚至能替代柱色譜[11]。張超等利用離心薄層層析從地菍中分離出槲皮素、廣寄生苷和山柰酚[18]。4.高效液相色譜法(HPLC)HPLC正相系統(tǒng)的固定相有硅膠柱和氨基柱,反相系統(tǒng)的固定相有C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱及C2柱等。流動(dòng)相一般用甲醇-水或乙腈-水系統(tǒng),并加入少量的酸(乙酸、磷酸、甲酸及磷酸二氫