小麥幼胚基因槍轉(zhuǎn)化的影響因素研究

小麥幼胚基因槍轉(zhuǎn)化的影響因素研究

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1、小麥幼胚基因槍轉(zhuǎn)化的影響因素研究麥類作物學(xué)報(bào)2006,26(2):42~45JournalofTriticeaeCrops小麥幼胚基因槍轉(zhuǎn)化的影響因素研究夏曉暉,陳耀鋒,李春蓮,呂瑞華,曹團(tuán)武,曹欣,趙云祥(西北農(nóng)林科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院,國家小麥改良中心楊陵分中心,陜西楊凌712100)搞要:為了明確不同因素對(duì)小麥基因槍法轉(zhuǎn)化效率的影響.用PDS一1000/He型基因槍將抑韻】葉片衰老基因Psag12一ipt轉(zhuǎn)入小麥幼胚細(xì)胞,通過對(duì)報(bào)告基因GUS瞬時(shí)表迭的檢測(cè),研究了金粉用量,質(zhì)粒DNA用量廈轟擊次數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響.結(jié)果表明,金粉用量在100~400g范圍內(nèi),時(shí)幼胚瞬時(shí)

2、表迭率影響不大,幼胚瞬時(shí)表迭率在73.7~85.0之間,但隨金粉用量的增加,細(xì)胞瞬時(shí)表迭率明顯提高;質(zhì)粒DNA用量以每槍2.0g為最佳;轟擊2搶幼胚和細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)率明顯高于轟擊1槍關(guān)鍵詞:小麥幼胚;基因槍;GUS基因;瞬時(shí)表迭;轉(zhuǎn)化效率中圖分類號(hào):S512.1;S336文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1009—1041(2006)02—0042—04EffectofFactorsonGUSTransientExpressionOfWheatImmatureEmbryoTransformatedbyParticleBombardmentXIAXiao—hui,CHENYao

3、—feng,LIChun—lian,LVRui—hua,CA0Tuan-Wll,CAOXin,ZHAOYun-xiang(CollegeofAgronomy,NorthwestA&FUniversity,YanglingBranchofNationalWheatImprovementCenter,Yangling,Shaanxi712100,China)Abstract:esag12一iptgenewastransformedintowheatimmatureembryocellsbyparticlebombardment.Theeffectsofgold

4、particleconcentrationandDNAamountperbombardmentontransformationefficiencyofwheatimmatureembryocellswerestudiedbyGUStransientexpression.Theresultshowedthatthegoldparticleconcentrationhadlittleaffectontransientexpressionofimmatureembryos,whileitplayedaremarkableroleinthecelltransientexp

5、ressionatarelativelyhighgoldparticleamountperbombardment.Itwasfoundthatthetransformationfrequencyofwheatimmatureembryocellswasthesuperiorwhencoatedby2.0/tgDNAandbombardedfor2timesperdish.Keywords:Immatureembryosofwheat(TriticumaestivumL);Particlebombardment;GUSgene;Transientexpression

6、;Transformationefficiency小麥?zhǔn)鞘澜缟现匾募Z食作物之一,將現(xiàn)代生物技術(shù)尤其是植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用于小麥的遺傳改良具有非常重要的意義.自美國學(xué)者Vasil等El,Z]利用基因槍將C,US和Bar基因?qū)胄←溒贩NPavon獲得對(duì)除草劑Basta具有抗性的再生植株以來,基因槍介導(dǎo)的小麥遺傳轉(zhuǎn)化研究有了長足的發(fā)展迄今,人們已利用基因槍轉(zhuǎn)化獲得了小麥抗除草劑,優(yōu)質(zhì),雄性不育等轉(zhuǎn)基因系.基因槍介導(dǎo)的小麥遺傳轉(zhuǎn)化展現(xiàn)出良好的發(fā)展和應(yīng)用前景.以往的研究在基因槍每槍最適金粉用量問題上,Altpeter等[引,Becher等[]認(rèn)為每槍3og金粉有利于獲得較高

7、的轉(zhuǎn)化頻率.安海龍等[5]研究了不同金粉用量對(duì)小麥幼胚瞬時(shí)表達(dá)及穩(wěn)定轉(zhuǎn)化頻率的影響,結(jié)果卻表明金粉用量以每槍500g為最佳.在基因槍每槍最適質(zhì)粒DNA用量上,未見有資料表明存在公認(rèn)的最佳用量,大多數(shù)學(xué)者采用每槍0.5~1.0big.還有些學(xué)者認(rèn)為過多的DNA用量會(huì)使金粉結(jié)塊,降低轉(zhuǎn)化效率.針對(duì)以上問題,本文著重研究了不同的金粉用量和質(zhì)粒DNA用量對(duì)小麥幼胚瞬時(shí)表達(dá)的影響,并就所獲得的幼胚和愈傷組織在細(xì)胞學(xué)形態(tài)及發(fā)育方面進(jìn)行了研究和探討.收稿日期:2005—08—23修回日期:2005—10—15基金項(xiàng)目l國家轉(zhuǎn)基因?qū)m?xiàng)(jy03…B2302);陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(

8、2003K

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