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《實(shí)驗(yàn) 二 細(xì)菌的芽孢染色》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的芽孢染色,鞭毛染色,莢膜染色生物科學(xué)賀冰冰040012010025周二9、0節(jié)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)細(xì)菌的芽孢染色法2學(xué)習(xí)細(xì)菌的鞭毛染色法3學(xué)習(xí)細(xì)菌的莢膜染色法二、實(shí)驗(yàn)原理1芽孢染色的原理:細(xì)菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無色透明狀）。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色但一旦染上色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。所有的芽孢染色法都基于同一個(gè)原則；除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢時(shí)，菌體也會(huì)著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲
2、出，而菌體會(huì)脫色。然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。2鞭毛染色的原理:細(xì)菌的鞭毛極細(xì)，直徑一般為0.01～0.02μm，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色的方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染劑處理、讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。3莢膜染色的原理:莢膜是細(xì)菌分泌到菌體周圍的一層黏液狀物質(zhì),通常是多糖和多肽類物質(zhì).由于
3、莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負(fù)染色法染莢膜，即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時(shí)一般不加熱固定。以免莢膜皺縮變形。三、實(shí)驗(yàn)器材1菌種：培養(yǎng)24h的枯草桿菌（Bacillcussubtilis）、培養(yǎng)12-16h的變形桿菌斜面,培養(yǎng)3d的固氮菌。2染色液和試劑：5％孔雀綠水溶液、番紅水溶液,鞭毛染色液A液與B液，蒸餾水，香柏油，顯微鏡擦拭液,繪圖墨水或黑色素溶液．3器材：酒精燈、接種環(huán)、鑷子、載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號(hào)筆、試管夾、顯微
4、鏡等。四、實(shí)驗(yàn)方法（一）芽孢染色：1涂片：按常規(guī)方法將待檢細(xì)菌制成一薄的涂片。2晾干固定；待涂片晾干后在酒精燈火焰上通過3次。3染色：A加染色液。加5％孔雀綠水溶液于涂片處（染料以鋪滿涂片為度），然后將涂片用試管夾夾住，用酒精燈火焰加熱至染液冒蒸汽對(duì)開始計(jì)算時(shí)問，約維持４～５min。加熱過程中要隨時(shí)交替添加染色液和蒸餾水，切勿讓標(biāo)本干涸（加熱時(shí)溫度不能太高）。B水洗：待玻片冷卻后，用水輕輕地沖洗，直至流出的水中無染色液為止。C復(fù)染：用番紅液染色２－３min。D水洗、晾干或吸干。4 鏡撿：先低倍，再高倍，最后在油鏡下觀
5、察芽孢和菌體的形態(tài)。結(jié)果：芽孢呈綠色，菌體為紅色。（二） 鞭毛染色 1制片：吸取少量蒸餾水滴在潔凈玻片的一端，無菌操作在斜面上取菌少許，在蒸餾水中輕沾，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端。用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。2 染色：1）滴加A液，染4～6min。2）用蒸餾水充分洗凈A液。3）用B液沖去殘水，再加B液于玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5～1.0min(加熱時(shí)應(yīng)隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的染料，不可使玻片出現(xiàn)干涸)。4)用蒸餾水洗，自然干燥。3鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。結(jié)果：菌
6、體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。（三） 莢膜染色：1制菌液：加1滴墨水于潔凈的載玻片上，挑少量菌體與其充分混合均勻。2推片：取一個(gè)清潔載玻片一端接觸混合液，以30°角進(jìn)行推片。3晾干：在空氣中自然晾干。4鏡檢：先用低倍鏡、再用高倍鏡、油鏡觀察。5結(jié)果：背景黑色，菌體因折光不同顯黑色或白色，在其周圍呈現(xiàn)明亮的透明圈即為莢膜。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1繪出所觀察菌種的芽孢和菌體的形態(tài)圖． 2繪出細(xì)菌鞭毛的形態(tài)以及著生位置． 3繪出固氮菌的菌體和莢膜的形狀。六、 思考題1用簡(jiǎn)單染色法能否觀察到細(xì)菌的芽孢?說明原因.不能。因?yàn)楹?jiǎn)單染色法沒辦
7、法給芽孢著色，芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難芽孢染色一般是利用細(xì)菌的芽孢和菌體對(duì)染料的親合力不同的原理，用不同染料進(jìn)行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。2用鞭毛染色法準(zhǔn)確鑒定一株菌是否有鞭毛,要注意哪些環(huán)節(jié)?染色液一定要新鮮，特別是硝酸銀染色法中更是如此，A染液和B染液最好都現(xiàn)用現(xiàn)配，A液一般不能放置。染色過程中的細(xì)節(jié)也應(yīng)充分注意：①取菌要取菌落邊緣的幼齡菌體。②取菌后的接種環(huán)在載片上的蒸餾水中輕輕沾幾下即可，不要用力太猛，更不能用接種環(huán)大幅度涂開；將載片稍傾斜，使菌液散開即可，否則鞭毛易脫落，造成染色
8、失敗。③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用熱風(fēng)吹干，不能熱固定，這是由于加熱后菌體易變形，鞭毛易脫落，影響觀察。④A染液染3～5min，其后用蒸餾水（自來水效果差）沖洗時(shí)一定要充分，否則加B染液后，背景很臟，鞭毛不易被觀察到，影響實(shí)驗(yàn)效果。⑤加B染液后，將玻片稍加熱（但不能太熱，更不能沸騰或蒸干）使其微冒蒸汽，30～60s，染色效果較不加熱為好
