2015初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證資料

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1、YSLH-JS-004-01初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證方案產(chǎn)品名稱：一次性包皮環(huán)切縫合器編制：日期：審核：日期：批準(zhǔn)：日期：江西狼和醫(yī)療器械股份限有限公司YSLH-JS-004-01目錄初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1．概述2．驗(yàn)證目的3．職責(zé)與驗(yàn)證申請(qǐng)4．驗(yàn)證依據(jù)5．驗(yàn)證計(jì)劃6．驗(yàn)證內(nèi)容YSLH-JS-004-01初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1.概述：初始污染菌的數(shù)量可以反映出車間環(huán)境衛(wèi)生的清潔度，與產(chǎn)品滅菌工藝、成品熱原及內(nèi)毒素有直接關(guān)系，故而要對(duì)其檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)其有效性及檢測(cè)準(zhǔn)確性，從而優(yōu)化產(chǎn)品滅菌工藝及控制產(chǎn)品熱原及內(nèi)毒素，確保產(chǎn)品的安全性。2.目的：通過(guò)實(shí)

2、驗(yàn)驗(yàn)證檢測(cè)方法的適用性及計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基的適用性。3.職責(zé)與驗(yàn)證申請(qǐng)：3.1質(zhì)量管理部提供檢測(cè)項(xiàng)目方案、接收標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)等級(jí)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)。3.2生產(chǎn)技術(shù)部負(fù)責(zé)按驗(yàn)證方案生產(chǎn)相關(guān)樣品初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證申請(qǐng)表驗(yàn)證組姓名職務(wù)單位黃燕組長(zhǎng)質(zhì)量管理部經(jīng)理江西狼和醫(yī)療器械股份有限公司龍章宏組員化驗(yàn)員蘇俊組員化驗(yàn)員胡梓鵬組員化驗(yàn)員批準(zhǔn)經(jīng)研究：同意以上成員組成驗(yàn)證小組，按照此方案對(duì)本公司的產(chǎn)品的初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證。批準(zhǔn)人：年月日4.依據(jù)：《中國(guó)藥典》2015版5.驗(yàn)證計(jì)劃：5.1實(shí)驗(yàn)操作人員確認(rèn)；5.2實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)設(shè)備及器材的確認(rèn)；5.3產(chǎn)品取樣及方法確認(rèn)。6.驗(yàn)證內(nèi)容：6.1

3、菌種和菌液制備YSLH-JS-004-016.1.1菌種試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。6.1.2菌液制備接種金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30?35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)；接種白色念珠菌的培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20?25℃培養(yǎng)2-3天，上述培養(yǎng)后的新鮮培養(yǎng)物用PH7.0無(wú)菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成）的菌懸液

4、。接種黑曲霉的培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂面培養(yǎng)基上，20?25℃培養(yǎng)5?7天，加人3?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無(wú)菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml孢子數(shù)量小于100cfu的孢子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2?8℃在24h內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液存在2?8℃，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)用。6.2計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查6.2.1需氧菌的計(jì)數(shù)分別取1ml的

5、金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35℃，培養(yǎng)不超過(guò)3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培養(yǎng)不超過(guò)5天。每一試驗(yàn)菌株平行制備2管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。6.2.2霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)分別取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌懸液，接種至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。在20-25℃，培養(yǎng)不超過(guò)5天。每一試驗(yàn)菌株平行制備2管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。6.2.2結(jié)果判定被

6、檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。6.2.3試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表16.3計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證6.3.1供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢品液制備在10000級(jí)環(huán)境中進(jìn)行。6.3.2接種和稀釋YSLH-JS-004-01按下列要求進(jìn)行供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗(yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過(guò)供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。（1）試驗(yàn)組取上述制備

7、好的供試液，加入試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過(guò)的供試液中含菌量不大于100cfu。（2）供試品對(duì)照組取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。（3）菌液對(duì)照組取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液,按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。若因供試品抗菌活性或溶解性較差的原因?qū)е聼o(wú)法選擇最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采用適宜的方法對(duì)供試液進(jìn)行進(jìn)一步的處理。如果供試品對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制作用無(wú)法以其他方法消除，供試液可經(jīng)過(guò)中和、稀釋或薄膜過(guò)濾處理后再加入試驗(yàn)菌懸液進(jìn)行方法適應(yīng)性試驗(yàn)。6.3.3抗菌活性的去除或滅活供試液接種后

8、，按下列“