初始污染菌方法驗(yàn)證

《初始污染菌方法驗(yàn)證》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、文件編號頁次3/3文件名稱初始污染菌方法驗(yàn)證版本/修改生效日期編制/日期審核/日期批準(zhǔn)/日期1.目的驗(yàn)證產(chǎn)品初始污染菌數(shù)的試驗(yàn)方法。2.范圍適用于質(zhì)量部門對產(chǎn)品初始污染菌數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)的檢測。3.職責(zé)質(zhì)量檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)執(zhí)行此規(guī)程。4.依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文件2010版《中華人民共和國藥典第二部》附錄ⅪJ微生物限度檢查法GB/T19973.1-2005《醫(yī)療器械的滅菌-微生物學(xué)方法-第一部分產(chǎn)品中微生物數(shù)量的估計(jì)》GB15980-2009《一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》5.試驗(yàn)產(chǎn)品6.注意事項(xiàng)6.1本操作應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的無菌操作臺內(nèi)進(jìn)行。操

2、作過程應(yīng)盡量避免任何可能使結(jié)果發(fā)生偏差的污染。6.2無菌操作臺必需定期進(jìn)行潔凈度檢測?試驗(yàn)前提前開紫外燈15min后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。6.3過濾器、濾膜、鑷子以及無菌設(shè)備杯使用前應(yīng)進(jìn)行滅菌?使用時應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。7.器材與試劑7.1器材35℃恒溫培養(yǎng)箱、23℃恒溫培養(yǎng)箱、滅菌器、潔凈工作臺、無菌過濾裝置、鑷子、剪子、電子天平、移液器、接種環(huán)7.2稀釋液、沖洗液及其制備方法稀釋液、沖洗液配制后按說明書要求進(jìn)行滅菌。pH7.0無菌氯化鈉溶液—蛋白胨緩沖液0.9%無菌氯化鈉溶液。7.3培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制。玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基：按

3、說明書方法保存配制。改良馬丁液體培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制。改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制。8.計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)當(dāng)建立產(chǎn)品初始污染菌數(shù)檢查法時，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新驗(yàn)證。驗(yàn)證時，按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)文件編號頁次3/3文件名稱初始污染菌方法驗(yàn)證版本/修改生效日期編制/日期審核/日期批準(zhǔn)/日期行。對各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。

4、8.1菌種培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為0代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus〔CMCC?B?26003〕大腸埃希菌Escherichiacoli〔CMCC?B?11102〕枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis〔CMCC?B?63501〕白色念珠菌Candidaalbicans〔CMCC?F?98001〕黑曲霉Aspergillusniger〔CMCC?F?98003〕8.2菌液制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿

5、菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，30-35℃培養(yǎng)18-24小時，接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上23-28℃培養(yǎng)24-48小時。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50-100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上23-28℃培養(yǎng)5-7天，加入3-5ml含0.05%（mol/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液,,將孢子洗脫。然后采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)?用含0.05%（mol/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為5

6、0-100cfu的孢子懸液。注：菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在2-8℃，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2-8℃?在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。8.3供試液的制備在潔凈工作臺內(nèi)，將樣品分別放入配制好的pH7.0無菌氯化鈉溶液—蛋白胨緩沖液中，充分震蕩，作為試驗(yàn)液。8.4培養(yǎng)條件細(xì)菌30-35℃培養(yǎng)3天；霉菌及酵母菌23-28℃培養(yǎng)5天；8.5驗(yàn)證方法8.5.1驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率★試驗(yàn)組菌回收率=（A-C）/B★稀釋劑對照組菌回收率=D/B8.5.2薄膜過濾法依據(jù)ISO11737-

7、1所述，膜過濾法尤其適用于微生物濃度較低的懸液。因此本驗(yàn)證首選薄膜過濾法。A.試驗(yàn)組①100ml樣品供試液②100ml稀釋的菌懸液，包括：1ml含50-100cfu的菌懸液和99mlPH7.0文件編號頁次3/3文件名稱初始污染菌方法驗(yàn)證版本/修改生效日期編制/日期審核/日期批準(zhǔn)/日期無菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液；B.菌液組①100ml稀釋的菌懸液，包括:1ml含50-100cfu的菌懸液和99mlPH7.0無菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液;C.供試品對照組①100ml樣品供試液②沖洗液:100ml無菌氯化鈉—蛋白胨緩沖液PH7.0D.稀釋劑對照組①100ml無菌氯化鈉—

8、蛋白胨緩沖液PH7.0②100ml稀釋的菌懸液,包括