弓形蟲烯醇化酶2基因的克隆與表達(dá)

《弓形蟲烯醇化酶2基因的克隆與表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、本科畢業(yè)論文題目弓形蟲烯醇化酶2基因的克隆與表達(dá)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院專業(yè)生物技術(shù)（動(dòng)物方向）畢業(yè)屆別2014屆姓名謝國(guó)華指導(dǎo)教師劉霞副教授張德林研究員甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)教務(wù)處制二〇一四年五月目錄摘要1關(guān)鍵詞1Abstract.1Keywords2前言21實(shí)驗(yàn)材料21.1目的基因、質(zhì)粒及菌株21.2主要實(shí)驗(yàn)試劑32方法32.1目的基因ENO2的擴(kuò)增32.2瓊脂糖凝膠電泳鑒定42.3克隆載體的構(gòu)建42.4重組質(zhì)粒的鑒定62.5重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)72.6表達(dá)產(chǎn)物的SDS－PAGE電泳檢測(cè)73結(jié)果73.1ENO2基因的RT-PCR擴(kuò)增73.2pMD-ENO2重組質(zhì)粒的酶切鑒定83.3pET-ENO2重組質(zhì)

2、粒的鑒定93.4ENO2基因表達(dá)產(chǎn)物SDS-PAGE分析…………………………………………………..94討論10參考文獻(xiàn)（Reference）:11致謝12謝國(guó)華：弓形蟲烯醇化酶2基因的克隆與表達(dá)弓形蟲烯醇化酶2基因的克隆與表達(dá)謝國(guó)華(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅蘭州；)摘要:弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，呈世界性分布，可感染包括人類在內(nèi)的所有脊椎動(dòng)物。弓形蟲嚴(yán)重威脅人類的生命健康，危害公共衛(wèi)生，對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展造成巨大損失。烯醇化酶(ENO1,ENO2)為蟲體不同時(shí)期的同工酶，具典型的期特異性，ENO2主要出現(xiàn)于速殖子時(shí)期。ENO2特異性定位在胞核中。本研究針對(duì)弓形蟲ENO基因序列

3、設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR技術(shù)從弓形蟲GJS株的cDNA中擴(kuò)增ENO2基因片段，構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD-ENO2。測(cè)序結(jié)果表明，獲得的基因序列與NCBI已公布的序列相似性為100%。將ENO2基因定向亞克隆至原核表達(dá)載體pET-30a（+）中，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定表明，ENO2基因在大腸桿菌中成功表達(dá)，以包涵體的形式為主，分子量大小約為1335bp。本研究為下一步研制基于排泄分泌抗原的抗弓形蟲重組疫苗奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：弓形蟲；烯醇酶2；克?。辉吮磉_(dá)Abstract:Toxoplasmagondiiisanobligateintracellul

4、arparasite,ithasaworldwidedistribution,andcaninfectallvertebrates,includinghumans.T.gondiihasseriousthreattohumanlifeandpublichealth,anditcauseshugelossestothedevelopmentofanimalhusbandry.Enolase(ENO1,ENO2)isanisozymewhichisexistsindifferentperiodsofT.gondii,andithastypicalspecificityindifferentper

5、iods.ENO2ismainlyappearedinthetachyzoite.WedesignedprimersaccordingtoENO2genesequencesofT.gondii,andENO2genewasamplifiedbyRT-PCRfromthecDNAofT.gondiiGJSstraintoconstructarecombinantplasmidpMD-ENO2.SequencingresultsshowedthatthegenesequenceandNCBIpublishedsequencesimilaritywas100%.ENO2genewassubclon

6、edandlinkedtoprokaryoticexpressionplasmidpET-30a(+),transformedintoE.coliBL21,andexpressedbyIPTGinduction.PolyacrylamidegelelectrophoresisidentificationshowedthattheENO2geneexpressedsuccessfullyinE.coli,whichgaveprioritytotheformofinclusionbody,andthesizeisabout1335bpmolecularweight.Thisstudylayafo

7、undationforfurtherdevelopmentofanti-T.gondiirecombinantvaccines,whicharebasedonthesecretedantigen.Keywords:Toxoplasmagondii;ENO2;clone;prokaryoticexpression前言13謝國(guó)華：弓形蟲烯醇化酶2基因的克隆與表達(dá)弓形蟲(Toxoplasmagondii)是一種專性