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《響應(yīng)面法優(yōu)化無花果多糖提取工藝的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、響應(yīng)面法優(yōu)化無花果多糖提取工藝的研究無花果是一種桑科榕屬植物無花果的干燥花托，具有廣泛的營養(yǎng)價值和藥用價值，不但香甜可口，而且具有潤肺止咳、健胃清腸、消腫解毒、增強機體免疫功能、抑制多種腫瘤的的功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，無花果富含黃酮、多糖、SOD等具有防治心血管疾病和老年性癡呆癥的生理活性物質(zhì)和具有抗癌功效的呋喃香豆素內(nèi)酯等物質(zhì)。近年來無花果抗腫瘤特性尤其受到人們的重視。目前國內(nèi)外在無花果抗癌方面的研究十分活躍。多糖是來自高等植物、動物細(xì)胞膜、微生物細(xì)胞壁中的天然大分子物質(zhì)，是所有生命有機體的重要組成部
2、分，與維持生命所需的多種生理功能有關(guān)?，F(xiàn)代研究表明，多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用、降血糖作用、抗感染作用、抗衰老作用、抗艾滋病等病毒以及抗疲勞、預(yù)防老年白內(nèi)障和糖尿病引起的視網(wǎng)膜病的并發(fā)癥等生理活性功能。因此，多糖的研究已成為各國共同關(guān)注的焦點。無花果非極性部位分離得到的苯甲醛、呋喃香豆素、三萜類、補骨脂素等已發(fā)現(xiàn)具有良好的抗腫瘤作用，而對其強極性部位分離的多糖的研究尚不夠深入。一般來說，優(yōu)化提取工藝的方法是單次單因子法和正交試驗設(shè)計法。單次單因子法已逐漸被我們淘汰，因為使用此種方法只能討論一種因素的影響，但是
3、各個因子并不是單獨作用的，它們之間總是存在或多或少的相互影響，所以使用該種方法并非總能獲得最佳的優(yōu)化條件。正交試驗設(shè)計法則在單次單因子法的基礎(chǔ)上更加科學(xué)合理地安排試驗，它與單次單因子法不同的是，它可以考慮到多種因素并且通過實驗組合尋找出最佳因素水平組合，但它的缺陷在于，無法提供響應(yīng)值及各變量間的準(zhǔn)確影響因子，即無法在給出的區(qū)域內(nèi)提供出一個準(zhǔn)確的關(guān)于變量及響應(yīng)值間的回歸方程，從而無法找到整個區(qū)域上因素的最佳組合和響應(yīng)值的最優(yōu)值。響應(yīng)面分析方法則遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于以上兩種方法，是一種試驗次數(shù)少、周期短，求得的回歸方程
4、精度高、能研究幾種因素間交互作用的回歸分析方法。響應(yīng)面方法(ResponseSurfaceMethodology，簡稱RSM)是利用合理的試驗設(shè)計通過實驗得到的一定數(shù)據(jù)，采用多元二次回歸方程來擬合因素與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，通過對回歸方程的分析來尋求最優(yōu)工藝參數(shù)，解決多變量問題的一種統(tǒng)計方法。本部分實驗通過響應(yīng)面法，確定無花果多糖提取的最佳工藝條件，為深入研究無花果多糖奠定基礎(chǔ)。1材料與方法1.1實驗材料無花果茶:江蘇省揚州市農(nóng)業(yè)科技特種經(jīng)濟作物合作社提供。1.2試劑與設(shè)備無水乙醇，丙酮，硫酸，苯酚，氯
5、仿，正丁醇等；低速離心機，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，分光光度計，真空冷凍干燥機，電子天平。1.3實驗方法1.3.1無花果多糖提取工藝無花果干果→粉碎過40目篩→精密稱取無花果粉末→氯仿抽提去脂→沸水浸提→過濾、濃縮→醇沉→過濾或離心→醇沉物清洗→凍干→粗多糖1.3.2多糖含量的測定采用苯酚－硫酸比色法。準(zhǔn)確稱取在105℃干燥至恒重的葡萄糖50mg，溶于500mL容量瓶中，定容至刻度，得到濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL比色管中，分別加
6、蒸餾水補足至2.0mL，然后再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚1.0mL，98%的濃硫酸5mL，放置10min，充分搖勻，沸水浴中反應(yīng)15min，取出迅速冷卻至室溫。以試劑空白為對照，在490nm處分別測吸光度，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行線性回歸。吸取一定體積多糖提取液于10mL比色管中，按上述操作測其吸光度，按照下式計算得多糖提取率。多糖提取率(%)=C×V×D/W×100式中，C為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出供試品的多糖濃度(μg/mL)，V為供試品溶液定容的體積(mL)，D為稀
7、釋的倍數(shù)，W為無花果樣品的質(zhì)量。1.3.3脫蛋白方法采用Sevag法，是在多糖提取液中加入氯仿：戊醇(或正丁醇)=5:1的混合溶劑，混合物劇烈振搖20～30min，蛋白質(zhì)與氯仿-戊醇(或正丁醇)生成凝膠物，離心，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)。1.3.4單因素實驗及響應(yīng)面試驗實驗中首先擬定浸提時間、、料液比和浸提次數(shù)進行單因素實驗。在單因素實驗成功的基礎(chǔ)上確定響應(yīng)面實驗工藝參數(shù)范圍，通過響應(yīng)面實驗確定最佳提取工藝條件。2結(jié)果與討論2.1多糖含量測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)實驗方法，得到多糖濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲
8、線回歸方程為y=4.4911x+0.0065，R2=0.9965，如圖1所示。圖1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1Standardcurveofglucose2.2單因素實驗結(jié)果2.2.1浸提時間對多糖得率的影響在料液比為1∶15、提取次數(shù)為1次的條件下，研究浸提時間對多糖得率的影響，結(jié)果見圖2。圖2浸提時間對多糖提取率的影響Fig.2Effectofextractiontimeontheextractionrate如圖2所示，多糖的提取過程與浸提
