油菜的自交和雜交技術(shù)

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1、實驗七油菜的自交和雜交技術(shù)一、目的了解油菜的花器構(gòu)造和開花習(xí)性；通過練習(xí)，初步掌握油菜的自交和雜交技術(shù)。二、內(nèi)容說明1、花器構(gòu)造油菜屬十字花科(Cruciferae)蕓薹屬（Brassica），常異花授粉(甘藍型和芥菜型，天然異交率一般為5%—10%，最高不超過30%)或異花授粉(白菜型，天然異交率一般為80%—90%以上)作物。油菜的花序為總狀無限花序，由主花序和分枝花序組成。在花序上互生許多單花，花由花柄、花萼、花冠和雄蕊等組成。花瓣4片與花萼4片互生，作十字形排列，稱十字花冠。雄蕊6枚，側(cè)面的一對為短花絲，中央的兩對為長花絲，特稱四強雄蕊。雌蕊由2心皮組成，由假隔

2、膜(胚座框)將子房隔成兩室。胚珠著生在心皮的邊緣，為側(cè)膜胚座。(圖7-1)2、開花習(xí)性油菜的開花順序是先主花序，而后第一分枝、第二分枝花序依次由上而下開放，同一花序的花朵無論是主花序還是分枝花序都是由下向上依次開放。油菜單株花期的長短因品種、氣候和裁培條件而異，一般為20—30天，每天開花時間一般在上午7時到12時，以9—11時開花最盛。油菜開花散粉的最適相對濕度為75%—85%，最適溫度約為14—18℃。10℃以下開花數(shù)減少，5℃以下一般不開花。油菜花的雌蕊較雄蕊先熟，且生活力較強，開花前后7天內(nèi)柱頭均具有受精能力，但以2—3天內(nèi)受精結(jié)實率最高。油菜的花粉落在柱頭上4

3、5分鐘后即可萌發(fā)，經(jīng)18—24小時完成受精過程。3、油菜的自交不親和性在油菜雜種優(yōu)勢的利用上，可用優(yōu)良的自交不親和系作母本，優(yōu)良品種作父本，產(chǎn)生強優(yōu)勢的雜交種用于生產(chǎn)，以提高油菜的產(chǎn)量。由于甘藍型和白菜型油菜的自交不親和系具有自交不親和基因，在開花前1—2天柱頭上可形成一種由特殊蛋白質(zhì)組成的“隔離層”，它作為一種“感受器”能識別和阻止相同基因型的花粉發(fā)芽，一般套袋自交很難得到種子，因此自交不親和系的保持和繁殖就必須在柱頭未形成這類蛋白質(zhì)的蕾期選株，并采用人工剝蕾后套袋自交或其它方法進行。三、材料儀器藥品1、材料不同甘藍型油菜（B.napusL.)或白菜型油菜(B.cam

4、pestrisL.)品種。2、儀器用具喉頭噴霧器、剪刀、鑷子、培養(yǎng)皿、玻璃紙袋（10cm×30cm）、回形針、塑料牌、鉛筆。3、藥品試劑70%酒精、10%NaCL。四、方法步驟(一)自交技術(shù)1、選株隔離(1)自交前1天，選具有該品種典型性狀、健壯無病蟲害的植株，用鑷子摘除花序上已開放的花朵，然后套袋隔離。(2)次日上午9時后，取下隔離袋，用鑷子摘下主花序上當(dāng)天開放的花朵，置于培養(yǎng)皿中，加蓋，待授粉時使用。2、剝蕾授粉(1)整序用鑷子摘除同一株上將開放的較大的花蕾和花序頂端幼小花蕾，剩下開花前2—4天的15—20個花蕾供剝蕾授粉。(2)授粉用鑷子將花瓣逐一剝開，使柱頭外露

5、(可以不去雄)，隨即用鑷子夾取培養(yǎng)皿中已開裂散粉的花藥，在剝開外露的柱頭上輕輕涂抹授粉。若有幾個組合同時授粉，每授完一個組合后用70%酒精棉球擦手和鑷子，殺死所蘸著的花粉。3、套袋掛牌授粉后重新套袋，下端袋口斜折，用回形針固定，注意切忌將回形針夾住莖稈，并在花序基部掛上塑料牌，寫明品種代號或名稱、自交日期和操作者姓名。4、管理授粉套袋后，每隔2—3天提升紙袋，以利花序伸長和避免穿破紙袋，約1周后取下紙袋，以利角果和種子的發(fā)育。5、收獲待角果成熟后，摘下整個花序連同塑料牌一起放入尼龍絲網(wǎng)袋中，曬干脫粒后，將種子連同塑料牌一起放入種子袋中，寫明品種代號或名稱，妥為貯存，并在

6、工作本上作好記錄。除上述剝蕾自交外，近年來也有探索用噴灑化學(xué)藥劑使隔離層蛋白溶解、沉淀和變性，以克服自交不親和，如用10%NaCl噴灑當(dāng)天開放的花朵，5—10分鐘后授以同株上的花粉，也可獲得自交種子。(二)雜交技術(shù)1.父本套袋隔離要雜交前1天，選具有父本品種典型性狀、健壯無病蟲害的植株，用鑷子摘去花序上已開放的花朵，然后套袋隔離，以供采粉。2.母本選株整序在父本套袋隔離的同時，選具有母本品種典型性狀、健壯無病蟲害的植株，用鑷子摘去花序上已開放的花朵和花序頂端的幼小花蕾，剩下次日即將開放(花萼已裂開、微露黃色)的10—15個花蕾供去雄。3.去雄用左手固定花序和花蕾，右手用

7、鑷子分開萼片和花瓣，小心地將6枚雄蕊摘去，切勿損傷柱頭和余留花藥，如遇花藥破裂，應(yīng)將該花去除，并將鑷子尖浸入酒精中，以殺死所蘸花粉。4.套袋掛牌待所有花蕾去雄完畢后，立即套上紙袋，下端袋口斜折，用回形針固定。5.授粉授粉于去雄后的當(dāng)天或次日選晴朗天氣進行。(1)采粉用鑷子摘取事先已套袋父本花藥已開裂的花朵，置于培養(yǎng)皿中，加蓋。(2)授粉取下母本株上的紙袋，用鑷子夾取培養(yǎng)皿中的花藥，在母本柱頭上輕輕涂抹授粉。授粉后立即套袋隔離，掛上塑料牌，寫明組合代號或名稱、雜交日期和操作者姓名，并在工作本上作好記錄。6.管理收獲和貯藏授粉后的管理、收獲和