發(fā)酵染菌原因分析

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1、發(fā)酵染菌原因分析第一部分：基礎(chǔ)知識(shí)1）雜菌的類型空氣中的微生物大多數(shù)是細(xì)菌和芽孢,還有一定數(shù)量的霉菌、酵母和病毒。細(xì)菌的大小有零點(diǎn)幾微米至幾個(gè)微米.根據(jù)以上特點(diǎn)我們應(yīng)得出如下結(jié)論：A：這些微生物在空氣中極少單獨(dú)游離存在,基本上是附著于灰塵、液滴等微粒的表面上。B：介質(zhì)過(guò)濾除菌就是把空氣中的各種微粒和極少量的游離微生物捕集起來(lái)予以除掉。因此我們通常所用的空氣過(guò)濾器為什么0.3u可以保證無(wú)菌發(fā)酵生產(chǎn)的原因。2）無(wú)菌檢查與染菌的處理在抗生素生產(chǎn)過(guò)程中,為了及早發(fā)現(xiàn)染菌并進(jìn)行恰當(dāng)處理,保證生產(chǎn)正常進(jìn)行,對(duì)菌種制備、種子罐、發(fā)酵罐的接種

2、前后和培養(yǎng)過(guò)程中,須要按工藝規(guī)程要求按時(shí)取樣，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)。A：無(wú)菌檢查培養(yǎng)液是否污染雜菌可從三個(gè)方面進(jìn)行分析：a:無(wú)菌試驗(yàn)b:培養(yǎng)液的顯微鏡拉查c:培養(yǎng)液的生化指標(biāo)變化情況。其中無(wú)菌試驗(yàn)是判斷染菌的主要依據(jù)。無(wú)菌試驗(yàn)現(xiàn)在采用的無(wú)菌試驗(yàn)方法有肉湯培養(yǎng)法、雙碟培養(yǎng)法、斜面培養(yǎng)法。其中以酚紅肉湯培養(yǎng)法和雙碟培養(yǎng)法結(jié)合起來(lái)進(jìn)行無(wú)菌檢查用的較多。(1)肉湯培養(yǎng)法直接用裝有酚紅肉湯的無(wú)菌試管取樣,然后放入37℃恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。定時(shí)觀察試管內(nèi)肉湯培養(yǎng)基的顏色變化,同時(shí)進(jìn)行顯微鏡觀察。（2）斜面培養(yǎng)法先用空白無(wú)菌試管取樣,然后在無(wú)菌條件

3、下接種于斜面培養(yǎng)基上,置于37℃恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。定時(shí)觀察有無(wú)雜菌菌落生長(zhǎng)。。（3）雙碟培養(yǎng)法種子罐樣品先取入肉湯培養(yǎng)基中,然后在無(wú)茵條件下在雙碟培養(yǎng)基上面劃線,剩下的肉湯培養(yǎng)物在恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)6小時(shí)后復(fù)劃線一次,發(fā)酵罐培養(yǎng)液直接取入空白無(wú)菌試管中,于37℃下培養(yǎng)6小時(shí)后在雙碟培養(yǎng)基上劃線。24小時(shí)內(nèi)的雙碟定時(shí)在燈光下檢查有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。24小時(shí)~48小時(shí)的雙碟1天檢查一次,以防生長(zhǎng)緩慢的雜菌漏檢。正常生產(chǎn)過(guò)程中,種子罐和發(fā)酵罐每隔8小時(shí)取樣一次,進(jìn)行無(wú)菌檢查。該方法經(jīng)常用于單菌落挑選，可以從染有雜菌的培養(yǎng)液中經(jīng)多次劃線挑

4、取單菌落進(jìn)行分離培養(yǎng)，得到純種的種子。無(wú)菌試驗(yàn)的結(jié)果一般需要8~12小時(shí)才能作出判斷。為了縮短判斷時(shí)間,有時(shí)向培養(yǎng)基中加入赤霉素、對(duì)氨基苯甲酸等生長(zhǎng)激素以促進(jìn)雜菌的生長(zhǎng)。B:染菌的判斷培養(yǎng)基的染菌判斷是錯(cuò)綜復(fù)雜的工作,又是一種細(xì)微觀察、認(rèn)真分析的王作。染菌罐的判斷方法：以無(wú)菌試驗(yàn)中的酚紅肉湯培養(yǎng)和雙碟培養(yǎng)的反應(yīng)為主,以鏡檢為輔。每個(gè)無(wú)菌樣品的無(wú)菌試驗(yàn)，至少用2只酚紅肉湯或斜面同時(shí)取樣培養(yǎng)。要定量或用接種環(huán)蘸取法取樣，公司現(xiàn)階段基本都直接從發(fā)酵罐直接取樣。因取樣量不同,影響顏色反應(yīng)和渾濁程度的觀察。如果連續(xù)3個(gè)時(shí)間的酚紅肉湯無(wú)菌

5、樣發(fā)生顏色變化或產(chǎn)生渾濁,或斜面連續(xù)3個(gè)時(shí)間樣品長(zhǎng)出雜菌即判斷為染菌。有時(shí)酚紅肉湯反應(yīng)不明顯,要結(jié)合鏡檢確認(rèn)連續(xù)3個(gè)時(shí)間樣品染菌，即判為染菌。各級(jí)種子罐的染菌判斷亦參照上述規(guī)定。對(duì)肉湯和無(wú)菌斜面的觀察及保存期的規(guī)定,發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)取無(wú)菌樣，以后每隔8小時(shí)取無(wú)菌樣一次，直至放罐。無(wú)菌試驗(yàn)的肉湯和雙碟應(yīng)保存并觀察至本罐批放罐后12小時(shí)，確認(rèn)無(wú)雜菌污染后方可棄去。無(wú)菌檢查時(shí)間應(yīng)每6小時(shí)觀察一次無(wú)菌試驗(yàn)樣品，以便能及早發(fā)現(xiàn)染菌。2、染茵率的統(tǒng)計(jì)以發(fā)酵罐染菌罐批(次)為基準(zhǔn),染菌罐批(次)應(yīng)包括染菌重消后的重復(fù)染菌的灌（批）次在內(nèi)。

6、發(fā)酵總過(guò)程(全周期)無(wú)論前期或后期染菌,均作“染菌”論處。發(fā)酵罐染菌罐批(次)染菌率(％)＝一一一一一一一一－－－X100%總投罐批(次)3）染菌(包括染噬菌體)的處理(一)污染雜菌的處理發(fā)酵罐污染雜菌后,依據(jù)染菌時(shí)間、所染雜菌的危害性及時(shí)進(jìn)行處理,同時(shí)對(duì)所涉及的設(shè)備也要及時(shí)處理。a.種子罐染菌的處理種子罐染菌后都不能往下道工序移種,要及時(shí)用高壓蒸汽直接滅菌后經(jīng)過(guò)濾處理放下水。b.發(fā)酵罐染菌的處理發(fā)酵罐前期染菌,污染的雜菌對(duì)產(chǎn)生菌的危害性大,采用蒸汽滅菌經(jīng)過(guò)濾處理后放掉;如果危害性不大,可用重新滅菌、重新接種的方式處理,如營(yíng)養(yǎng)

7、成分消耗較多,可放掉部分培養(yǎng)液補(bǔ)入部分新培養(yǎng)基后進(jìn)行滅菌,重新接種；如污染的雜菌量少且生長(zhǎng)緩慢,可以繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)下去,但要時(shí)刻注意雜菌數(shù)量和代謝的變化。在發(fā)酵的中后期染菌,一是加入適量的殺菌劑,如呋喃西林或某些抗生素,抑制雜菌的生長(zhǎng)。二是降低培養(yǎng)溫度或控制補(bǔ)料量來(lái)控制雜菌的生長(zhǎng)速度。如果采用上述兩種措施仍不見(jiàn)效,就要考慮提前放罐。c、染菌后的設(shè)備處理..染菌后的罐體用甲醛等化學(xué)物質(zhì)處理,再用蒸汽滅菌〈包括各種附屬設(shè)備〉。在再次投料之前,要徹底清洗罐體、附件,同時(shí)進(jìn)行嚴(yán)密程度檢查,以防滲漏。染菌后的處理尤為重要，很多大面積染菌都是由

8、于處理不徹底而造成的系統(tǒng)污染，造成無(wú)法及時(shí)處理好各個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)連續(xù)污染。(二)污染噬菌體的處理抗生素等產(chǎn)品發(fā)酵過(guò)程中有時(shí)出現(xiàn)噬菌體污染,輕者造成生產(chǎn)能力大幅度下降,重者造成停產(chǎn)。一般噬菌體污染后往往出現(xiàn)發(fā)酵液突然轉(zhuǎn)稀,泡沫增多,早期鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體染色不均勻，在較短時(shí)間內(nèi)菌體大量自