rsap分子標(biāo)記技術(shù)在園藝植物研究中的應(yīng)用

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1、BIOTECHNOLOGYBULLETIN·技術(shù)與方法·2012年第1期RSAP分子標(biāo)記技術(shù)在園藝植物研究中的應(yīng)用任羽1王得元2黃少華1徐世松1張志群1（1中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，儋州571737；2廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所，廣州510640）摘要：限制性位點(diǎn)擴(kuò)增多態(tài)性（RSAP）是一種基于PCR的新型植物分子標(biāo)記技術(shù)，具有操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定、效率較高的特點(diǎn)。該技術(shù)以植物基因組上廣泛分布的限制性位點(diǎn)位為靶標(biāo)，通過獨(dú)特的引物設(shè)計(jì)和PCR擴(kuò)增程序，無需限制性酶切環(huán)節(jié)，只要一個簡單的PCR，即可產(chǎn)生基于植物限制性位點(diǎn)的多態(tài)性標(biāo)記。闡述了RS

2、AP的原理與流程，對該技術(shù)的優(yōu)勢和應(yīng)用情況做了總結(jié)，并對其前景進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞：園藝植物限制性位點(diǎn)擴(kuò)增多態(tài)性（RSAP）分子標(biāo)記RSAPMolecularMarkerTechniqueandItsApplicationofHorticulturePlants12111RenYuWangDeyuanHuangShaohuaXuShisongZhangZhiqun（1TropicalCropsGeneticResourcesInstitute,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Danzhou57173

3、7；2VegetableInstitute,GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou510640）Abstract:Restrictionsiteamplifiedpolymorphism（RSAP）,anovelPCR-basedplantmarkertechnique,featureseasy,reliability,andefficientcharacteristic.Targetedtorestrictionsitesdispersedamongplantgenomes,RSAPadopte

4、duniqueprimerdesignandPCRproceduretogeneratepolymorphicmarkersatrestrictionsites,withoutrestrictedenzymedigesting.ThispaperdescribesdtheprincipleandprotocolofRSAP,analysestheadvantageandtheapplicationofRSAPmarkertechnique,anddiscussestheprospectofthistechnique.Keywords:Horticultu

5、rePlantsRestrictionsiteamplifiedpolymorphism（RSAP）MolecularmarkerDNA標(biāo)記以其數(shù)量多、多態(tài)性高、可直接反映生物基因組多態(tài)性等優(yōu)點(diǎn)，目前已被廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性分析、連鎖圖譜構(gòu)建、重要性狀基因標(biāo)記及標(biāo)記輔助選擇等方面，在植物遺傳育種和基因組研究中發(fā)揮著越來越重要的作用。通過錨定生物基因組中不同種類的位點(diǎn)或序列，采用一定的檢測手段，目前已發(fā)展出了多種DNA標(biāo)記技術(shù)。如限制性片段長度多態(tài)性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）［1］、擴(kuò)增片段長度

6、多態(tài)性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP）［2］、切割A(yù)FLP（cleavedAFLP，cAFLP）［3］等錨定的是基因組上的限制性位點(diǎn)，分別采用特定的方法檢測這些位點(diǎn)上存在的多態(tài)性；簡單重復(fù)序列多態(tài)性（simplesequencerepeat，SSR）錨定的則是基因組上的簡單重復(fù)序列，檢測其因重復(fù)次數(shù)不同產(chǎn)生的多態(tài)性［4］；相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（sequence-relatedamplifiedpolymorphism，SRAP）［5］、目標(biāo)區(qū)域擴(kuò)增多態(tài)性（targetregionamplifiedpoly

7、morphism，TRAP）［6］錨定的是基因編碼區(qū)，因啟動子或內(nèi)含子差異產(chǎn)生的多態(tài)性標(biāo)記；反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子間擴(kuò)增多態(tài)性（inter-retrotransposonamplifiedpolymorphism，IRAP）則錨定反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子，通過PCR擴(kuò)增檢測它們之間DNA片段長度多態(tài)性［7］。限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)（簡稱限制性位點(diǎn)）在生物基因組上分布廣泛?；谙拗菩晕稽c(diǎn)，科學(xué)家們首先創(chuàng)建了RFLP標(biāo)記，該標(biāo)記技術(shù)采用克隆的收稿日期:2011-07-12基金項(xiàng)目:國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2007BAD45B06）,海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30824）,中央級公益性科

8、研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（2011PZS067）,廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（000