響應(yīng)面法優(yōu)化微波提取柚皮總黃酮工藝論文

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1、響應(yīng)面法優(yōu)化微波提取柚皮總黃酮工藝論文1實(shí)驗(yàn)材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料:蜜柚,九成熟(市售)、蘆?。ㄖ袊幤飞镏破窓z定所提供);無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉均為優(yōu)級(jí)純;二次蒸餾水1.2主要儀器設(shè)備:FA2004型電子天平(上海精科);722-1型電熱恒溫干燥箱(湖北省黃石市醫(yī)療器械廠);HK-04A200g手提式粉碎機(jī)(廣州旭朗機(jī)械設(shè)備);WD900ASL23-2型微波爐(格蘭仕);SHZ-III循環(huán)水多用真空泵(上海亞榮生化儀器廠);722型可見分光光度計(jì)1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1實(shí)驗(yàn)材料的預(yù)處理柚皮→洗凈→切片→5

2、0℃干燥→冷卻→粉碎過40目篩→制得柚皮粉。1.3.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程精確稱取蘆丁對(duì)照品0.01g用80%乙醇溶解,定容于100ml容量瓶中,配制成0.1g/L的蘆丁對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確移取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml的蘆丁對(duì)照品溶液于10ml容量瓶中,用乙醇補(bǔ)充至3.0,加入5%亞硝酸鈉溶液0.5ml,搖勻后放置6min,然后加入10%硝酸鋁溶液0.5ml,搖勻后放置6min;最后加入1mol/L氫氧化鈉溶液4ml,用80%乙醇補(bǔ)充至刻度,搖勻后放置15-20min,以相應(yīng)試劑做空白,于51

3、0nm處測(cè)定吸光度,制作蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性回歸得到吸光度A與黃酮質(zhì)量濃度的方程:A=12.136c—0.0045,相關(guān)系數(shù)R=0.9980.1.3.4微波法提取總黃酮的方法稱取1.00g柚皮粉于錐形瓶中,加入80%乙醇溶液35mL,在解凍檔下微波處理6min(每次加熱2min,放置1min,累計(jì)達(dá)6min),過濾,定容至10011mL。采用硝酸鋁比色法,在510nm處測(cè)定吸光度,計(jì)算總黃酮得率。1.3.5總黃酮類物質(zhì)的測(cè)定按以上方法用提取液代替蘆丁實(shí)驗(yàn),利用回歸方程進(jìn)行計(jì)算即可?! =m1V2D/m×100%式中X———樣

4、品中總黃酮含量,mg/mL;   m1———根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)液中黃酮的量,mg;   m———樣品質(zhì)量,g;   D———樣品的總稀釋倍數(shù);V2———樣品提取液總體積,mL。2結(jié)果與討論2.1微波法提取總黃酮工藝條件單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)2.1.1乙醇濃度對(duì)總黃酮提取效果影響稱取5份1.00g柚皮粉分別置于錐形瓶中,在料液比固定在1:35、提取時(shí)間為5min,解凍檔的條件下,分別對(duì)柚皮粉按以下不同乙醇濃度50%、60%、70%、80%、90%進(jìn)行微波提取,布氏抽濾,濾渣以同樣的條件提取、抽濾,合并濾液,然后用相應(yīng)濃度的乙醇水溶

5、液定容至50mL,按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法得出柚皮中總黃酮的提取率,結(jié)果見圖1。圖1乙醇濃度對(duì)總黃酮提取率的影響由圖1可知,隨著乙醇濃度的增加,總黃酮的提取率也在升高,在乙醇濃度為80%時(shí)達(dá)到最大值,但當(dāng)乙醇濃度繼續(xù)增大時(shí),提取率下降,因此乙醇濃度11為80%左右為宜。2.1.2料液比對(duì)總黃酮提取效果的影響稱取5份1.00g柚皮粉分別置于錐形瓶中,在乙醇濃度固定在80%、提取時(shí)間為5min,解凍檔的條件下,分別對(duì)柚皮粉按以下不同料液比1:20、1:25、1:30、1:35、1:40進(jìn)行微波提取,方法同上,得出總黃酮提取率,結(jié)果

6、見圖2。圖2料液比對(duì)總黃酮提取率的影響由圖2可以看出,在液料比為1:20到1:35增加的過程中,總黃酮的得率隨液料比的增大升高,液料比1:35是達(dá)到最大,隨后提取率下降,因此選取1:35較為合適。2.1.3提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取效果的影響稱取5份1.00g柚皮粉分別置于錐形瓶中,在乙醇濃度固定在80%、料液比為1:35的條件下,分別對(duì)柚皮粉按以下不同提取時(shí)間3、4、5、6、7min進(jìn)行微波提取,方法同上,得出總黃酮提取率,結(jié)果見圖3。圖3提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取率的影響11由圖3可以看出,開始時(shí)總黃酮得率隨提取時(shí)間的延長而升高,當(dāng)

7、提取時(shí)間達(dá)到6min時(shí),總黃酮得率達(dá)到最高,之后隨時(shí)間繼續(xù)延長,總黃酮得率不再提高反而略有下降,因此選擇提取時(shí)間為6min為宜。2.2中心實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與響應(yīng)面分析采用軟件Design-Expert8.0中的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理[14],在乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間3個(gè)因素對(duì)柚皮總黃酮提取率的研究的基礎(chǔ)上,綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果,采用響應(yīng)面分析法在3因素3水平上,以乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間3個(gè)因素為自變量,柚皮總黃酮提取率為響應(yīng)值進(jìn)行優(yōu)化,以達(dá)到最大限度提取柚皮總黃酮的目的。試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)表見表1,響應(yīng)面試驗(yàn)方案及

8、結(jié)果見表2。表1Box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平水平因素乙醇濃度%(A)料液比(g:mL)(B)提取時(shí)間min(C)-1701:3050801:3561901:407表2Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)A:乙醇濃度%B:料液比C:提取時(shí)間minY:總黃酮得率%

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