怎樣使用大鼠睪酮(t)elsia試劑盒

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1、酶聯(lián)生物WWW.MLBIO.CN021-61725725THG怎樣使用大鼠睪酮(T)ELSIA試劑盒睪酮在不孕不育領(lǐng)域?yàn)閮?nèi)分泌異常檢查項(xiàng)目,直接反映出病因所在治療起來(lái)更精準(zhǔn)。大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T；產(chǎn)品別名：大鼠睪酮(T)ELISA檢測(cè)試劑盒，大鼠睪酮(T)酶聯(lián)免疫試劑盒，大鼠睪酮(T)酶聯(lián)分析試劑盒；英文名稱：TELISAKit；檢測(cè)范圍：5nmol/L-160nmol/L大鼠睪酮(T)ELSIA試劑盒用于測(cè)定大鼠血清樣本中睪酮(T)含量。大鼠睪酮(T)ELSIA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠睪酮(T)水平。用純化的大鼠睪酮(T)抗體

2、包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入睪酮(T)，再與HRP標(biāo)記的睪酮(T)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的睪酮(T)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠睪酮(T)濃度。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP

3、）活性。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6

4、．底物請(qǐng)避光保存。7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。實(shí)驗(yàn)操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。160nmol/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80nmol/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40nmol/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20nmol/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10nmol/L1

5、號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。酶聯(lián)生物WWW.MLBIO.CN021-61725725THG1.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用2.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)

6、5次，拍干。3.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。4.溫育：操作同3。5.洗滌：操作同5。6.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。8.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作程序總結(jié)：實(shí)驗(yàn)計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣

7、品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月酶聯(lián)生物WWW.MLBIO.CN021-61725725THG大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（320nmol/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml×1/瓶12密