洋蔥鱗莖和黃豆表皮細(xì)胞液泡系的活體染色

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1、洋蔥鱗莖和黃豆表皮細(xì)胞液泡系的活體染色摘要：活體染色是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色，但又無毒害的一種染色方法。本文使用中性紅染料對洋蔥鱗莖細(xì)胞和黃豆表皮細(xì)胞進(jìn)行了活體染色，均得到了較好的染色效果。關(guān)鍵詞：活體染色；液泡系；染色技術(shù)；植物細(xì)胞Abstract：Vitalstainingisatechniquethatcandyethelivingorganiccellwithouttoxicity.Inthisexperimentthebeanepidermiscellsandonionbulbc

2、ellswereproceededvitalstainingbyneutralred，andwegoteligiblesamples．Keyword：Vitalstaining，Vacuome，Stainingtechnique，Plantcell前言早在1887年，荷蘭植物生理學(xué)家P.feffer首先用次甲基藍(lán)的稀釋溶液對水棉和藍(lán)藻及浮萍葉細(xì)胞的液泡進(jìn)行活體染色。當(dāng)時(shí)對他的實(shí)驗(yàn)沒有引起重視。直到20世紀(jì)30年代前后，法國著名的植物學(xué)家季爾蒙（A.Guillermond）和唐薩爾（P.A.Dange

3、ard）兩個(gè)學(xué)派系統(tǒng)地、全面地進(jìn)行活體染色劑的使用，利用活體染色技術(shù)來研究活的植物細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞質(zhì)基本形態(tài)構(gòu)造的組成物。他們先后提出了“液泡系統(tǒng)”和“線粒體系統(tǒng)和質(zhì)體系統(tǒng)”的學(xué)說。從1924年至1934年，法國的M.Parat又系統(tǒng)地、深入地利用活體染色技術(shù)，并與其他新技術(shù)結(jié)合，研究動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)基本的形態(tài)結(jié)構(gòu)、演進(jìn)規(guī)律及其生理功能。Parat第一次在動(dòng)物活細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)液泡系，提出了“液泡系和高爾基區(qū)學(xué)說”。蘇聯(lián)的拿索諾夫?qū)W派，后來還在Parat學(xué)說的基礎(chǔ)上，應(yīng)用中性紅活體染色技術(shù)來研究細(xì)胞的“類

4、壞死”現(xiàn)象和醫(yī)學(xué)上的一些問題。自20世紀(jì)30年代以后，這種新技術(shù)才越來越顯示它的重要性，成為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)的一種研究方法。過去在細(xì)胞學(xué)方面曾利用一些老的、簡單又方便的方法來研究細(xì)胞，就是活的觀察方法。但是這種方法有很大的局限性，因?yàn)橛^察時(shí)間很短，不能顯示細(xì)胞的詳細(xì)構(gòu)造。至于固定染色的切法，雖然能夠顯示出細(xì)胞內(nèi)的詳細(xì)構(gòu)造，但往往引起細(xì)胞內(nèi)發(fā)生“人工效應(yīng)”而將某些本來存在的、重要的構(gòu)造在固定的過程中被毀掉或變形。過去在相當(dāng)長的時(shí)間，不知道活細(xì)胞內(nèi)的兩種重要的細(xì)胞器—線粒體系和液泡系—就是因?yàn)檫@個(gè)緣故。于是活

5、體染色技術(shù)就應(yīng)運(yùn)而生，可以說這是介于活體觀察和固定、切片染色之間的一種方法。它的目的是顯示活細(xì)胞內(nèi)的某些天然的構(gòu)造，而不引起細(xì)胞的物理、化學(xué)的變化。因此活體染色應(yīng)該顯示出動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)某些天然構(gòu)造存在的真實(shí)性。而且在染色過程中對細(xì)胞生命不受影響。因此，我們可以給活體染色下這樣的定義“7活體染色是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色，但又無毒害的一種染色方法。目的在于顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些天然結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡?；铙w染色技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞結(jié)構(gòu)

6、和生理、病理狀態(tài)[1,2]?！被铙w染色與體外活體染色，活體染色是指一個(gè)獲得動(dòng)物或植物的細(xì)胞活組織被染色。至于體外活體染色是指也獲得動(dòng)物或植物分離出來的一部分細(xì)胞或一部分組織被一種活體染色劑染色而不影響細(xì)胞活組織的生命?；铙w染色與體外活體染色的主要區(qū)別：活體染色是在有機(jī)體內(nèi)部，因此不在空氣中而是在還原的環(huán)境中進(jìn)行的，至于體外活體染色是在空氣中，在氧化的環(huán)境中進(jìn)行的。所以一種真正的活體染色劑就是在一種生物的活細(xì)胞的某種構(gòu)造上面的染料，但對于細(xì)胞、對于組織和對于生命本身不發(fā)生任何有害的作用[3]。原理：一

7、般的生物材料不能穿透細(xì)胞膜，只有當(dāng)細(xì)胞被固定后，細(xì)胞膜被破壞，染料才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部.但是，有一些染料（稱“活體染料”）卻能進(jìn)入活細(xì)胞，它們是一些無毒或毒性很小的染色劑，能使細(xì)胞中某些特定結(jié)構(gòu)著色?；铙w染料基本上不影響或很少影響細(xì)胞的生命活動(dòng)?；铙w染料多為堿性染料，如中性紅、詹納斯綠B、次甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)、亮焦油紫等，它們解離后帶正電，其中有的染料與胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)有專一性接合。例如，中性紅可專一的使液泡系染色[4]。液泡系是凡是由內(nèi)膜所包圍的小泡和液泡，除線粒體和質(zhì)體外，都屬于液泡系。液泡的類型可分為以

8、下幾種：①高爾基液泡，由高爾基體成熟面高爾基地邊緣形成的小泡，其中含有水解酶等。②溶酶體，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成，其中含有水解酶，溶酶體是溶解或消化小體，內(nèi)含各種水解酶，在動(dòng)植物細(xì)胞中都含有這類細(xì)胞器。細(xì)菌內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)溶酶體。溶酶體的功能有三個(gè)方面：正常消化作用、自體吞噬、細(xì)胞自溶作用。③圓球體，為植物細(xì)胞所特有，相當(dāng)于溶酶體，也是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成。④微體，按其中所含的酶來確定它們的性質(zhì)。⑤自噬小體，由一層膜將一小部分細(xì)胞質(zhì)包圍而成，其中被消化的物質(zhì)是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有的各種組成，如線粒體