實驗三細(xì)胞內(nèi)液泡系和線粒體的活體染色.ppt

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1、實驗三細(xì)胞內(nèi)液泡系和線粒體的活體染色實驗?zāi)康亩x及原理操作程序作業(yè)返回大綱一實驗?zāi)康牧私饣铙w染色的定義及原理熟悉液泡系和線粒體活體染色的方法和步驟掌握動植物細(xì)胞活體染色的原理和相關(guān)的技術(shù)返回二定義及原理所謂活體染色，是指利用某些無毒或毒性較小的染色劑顯示出細(xì)胞內(nèi)某些天然構(gòu)造存在的真實性，而不影響細(xì)胞的生命活動，不產(chǎn)生任何物理化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡的染色方法。即在染色和觀察過程中，細(xì)胞或組織始終保持其生命狀態(tài)?；钊痉◤浹a(bǔ)了活觀察法不能顯示細(xì)胞精細(xì)結(jié)構(gòu)的不足，也避免了固定染色法對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破環(huán)和造成人為假象的弊病。遺憾的是，適宜活

2、體染色的染料較少，能顯示出的結(jié)構(gòu)和種類也不多。二定義及原理活體染色分為體內(nèi)活染和體外活染兩種。前者是將染料注射于生物體內(nèi)，染色后再取材觀察。后者是取材后，對年離體的活細(xì)胞進(jìn)行染色。為保持離體細(xì)胞的正常存活，染色時需供給細(xì)胞以正常的溫度，滲透壓，PH等。關(guān)于活染的機(jī)制，一般認(rèn)為，線粒體能被健那綠-B染成蘭色，是由線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶使染料保持在氧化狀態(tài)，即有色狀態(tài)，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原成無色的色基，液泡系被中性紅染色，則主要是染料的堆積作用。中性紅為堿性染料，其膠粒表面帶陽離子，被染部分具陰離子，它們彼此之間就發(fā)生了

3、電吸附作用（靜電吸附）。返回二定義及原理液泡是細(xì)胞內(nèi)濃縮產(chǎn)物的主要場所，有十分重要的功能。中性紅（neutralred）是液泡的特殊染色劑，只將液泡染成紅色。在細(xì)胞處于生活狀態(tài)時，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被中性紅染色。線粒體是細(xì)胞內(nèi)的一個重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所。健那綠－B（JanusgreenB）對線粒體具有專一性的染色，是毒性最小的堿性染料。健那綠－B染色是由于線粒體中的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)，呈藍(lán)綠色，而周圍的細(xì)胞質(zhì)被還原成無色的色基。三操作程序用鑷子撕取萵筍葉片下表皮細(xì)胞，置于中性紅中染色10分鐘

4、?？梢娫S多大小不同的液泡，有些液泡處于不斷晃動之中。三操作程序用解剖針破壞蛙的脊髓，然后把腹部皮膚剪開，使露出胸骨的劍突部分，剪取劍突軟骨邊緣最薄的部分一小塊，放入載片中央的中性紅染液中，染色10—30分鐘，蓋上蓋玻片。用高倍鏡觀察，可見軟骨細(xì)胞為橢圓形、細(xì)胞核及核仁清楚易見，在細(xì)胞核的上方有許多被染成玫瑰紅大小液泡，此區(qū)即液泡區(qū)。三操作程序取蛙肝臟邊緣一小塊組織，放入生理鹽水中洗滌去除血液，將肝組織置于滴有健那綠-B的載玻片上，用鑷子鑷或撕拉肝組織，然后將整快的肝組織移出，加蓋玻片觀察破碎的肝細(xì)胞。染色10min左右．可見玻片上有

5、形狀規(guī)則的橢圓形血細(xì)胞，形狀不規(guī)則的近于方圓形的肝細(xì)胞及遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于細(xì)胞的作不規(guī)則運動的線粒體。三操作程序用鑷子撕取玉樹葉葉片下表皮，健那綠-B染色10分鐘，可在細(xì)胞質(zhì)中看到隨細(xì)胞質(zhì)環(huán)流而運動的被染成蘭色的線粒體。三操作程序用鑷子撕取萵筍葉片下表皮細(xì)胞，置于中性紅中染色10分鐘。可見許多大小不同的液泡，有些液泡處于不斷晃動之中。用解剖針破壞蛙的脊髓，然后把腹部皮膚剪開，使露出胸骨的劍突部分，剪取劍突軟骨邊緣最薄的部分一小塊，放入載片中央的中性紅染液中，染色10—30分鐘，蓋上蓋玻片。用高倍鏡觀察，可見軟骨細(xì)胞為橢圓形、細(xì)胞核及核仁清楚易

6、見，在細(xì)胞核的上方有許多被染成玫瑰紅大小液泡，此區(qū)即液泡區(qū)。取蛙肝臟邊緣一小塊組織，放入生理鹽水中洗滌去除血液，將肝組織置于滴有健那綠-B的載玻片上，用鑷子鑷或撕拉肝組織，然后將整快的肝組織移出，加蓋玻片觀察破碎的肝細(xì)胞。染色10min左右．可見玻片上有形狀規(guī)則的橢圓形血細(xì)胞，形狀不規(guī)則的近于方圓形的肝細(xì)胞及遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于細(xì)胞的作不規(guī)則運動的線粒體。用鑷子撕取玉樹葉葉片下表皮，健那綠-B染色10分鐘，可在細(xì)胞質(zhì)中看到隨細(xì)胞質(zhì)環(huán)流而運動的被染成蘭色的線粒體。返回作業(yè)繪制中性紅活染的液泡系圖和健那綠-B活染的線粒體圖,并作簡要分析。返回