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1、金黃色葡萄球菌A蛋白百科內(nèi)容來自于:金黃色葡萄球菌A蛋白(StaphylococalProteinA,SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細胞壁分離的蛋白質(zhì)。早在1940年,Vevwey發(fā)現(xiàn)在某些金黃色葡萄球菌中,含有一種物質(zhì),在雙向擴散試驗中能與正常人血清形成沉淀。Jensen也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,并將其命名為A抗原。直到1963年Lofkvist等分離了該抗原,并證明它是一種蛋白質(zhì)。為與A與糖相區(qū)別,Grov將其命名為金黃色葡萄球菌A蛋白,簡稱SPA或蛋白A。由于SPA的一些免疫特性,它已引起廣大免疫學(xué)者的興趣
2、,并發(fā)展成為免疫學(xué)上一種極為有用的工具。研究概述金黃色葡萄球菌A蛋白分析:金黃色葡萄球菌A蛋白膠體金(SPA-CG)分子的特征性構(gòu)象特點,探討其作為原子力顯微鏡觀測原位標(biāo)記物的可行性。方法:應(yīng)用原子力顯微鏡掃描生理狀態(tài)下分布在云母表面的金黃色葡萄球菌A蛋白膠體金分子,并進行結(jié)構(gòu)分析及理論計算。結(jié)果:極少數(shù)平臥的SPA-CG呈中部球形隆起,兩端長短不一的彎曲棒狀肽鏈環(huán)抱球形隆起的獨特結(jié)構(gòu),形成反“C”字形結(jié)構(gòu),球形隆起直徑為單個膠體金直徑的3~4倍;極少數(shù)SPA-CG呈逗號樣;絕大多數(shù)SPA-CG呈一側(cè)面
3、稍凹的橢球形結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、均一,長徑為(40.88±1.58)nm,寬徑為(20.82±0.68)n,高度(Z軸)為(10.51±0.28)nm。結(jié)論:單個膠體金標(biāo)記的金黃色葡萄球菌A蛋白分子具有獨特、穩(wěn)定、均一的特征性構(gòu)象,可作為原子力顯微術(shù)觀測的原位標(biāo)記物。性質(zhì)特點臨床常見葡萄球菌菌種(1)SPA存在于大多數(shù)金黃色葡萄球菌中,而不存在于表皮葡萄球菌中。并且主要存在于血漿凝固酶陽性菌株,而不存在于陰性菌株中。前者是致病的,后者是非致病的,但在體內(nèi)研究中尚未發(fā)現(xiàn)SPA和菌株致病性之間有任何肯定的關(guān)系。
4、不同菌株間的SPA含量有明顯差異,以I株金黃色葡萄球菌含SPA量最高,SPA和細胞壁的肽聚糖呈共價結(jié)合??苟籽趸角嗝顾赝蛔冎昴墚a(chǎn)生分泌性SPA,它較之細胞壁所含的SPA在免疫學(xué)性質(zhì)上相似,但易分離,損失少。(2)SPA為蛋白質(zhì)成分,僅含少量或不含碳水化合物,其分子量因提取方法不同而異,用脫氧核糖核酸酶消化細胞壁后超速離心或用加熱油提法,所測分子量為12000~15000。用沉淀平衡分析和在6mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽中凝膠過濾,測出分子量為42000。SPA為多肽單鏈,內(nèi)含3個高度相似的Fc段結(jié)合區(qū),每
5、區(qū)由50個以上的氨基酸組成,不含色氨酸和半胱氨酸。其羧基末端是賴氨酸,氨基末端結(jié)構(gòu)尚未肯定。SPA粘度高于球蛋白,等電點為pH5.1,其天然結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定,在應(yīng)用6mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽變性劑的條件下,尚能保存某些三級結(jié)構(gòu),如將此變性劑除去,則能自然矯正而恢復(fù)原有結(jié)構(gòu)。(3)SPA之所以引起免疫學(xué)家的重視,是因為它具有的免疫學(xué)特性。SPA具有和人與許多動物如豚鼠、豬、小鼠、猴等IgG結(jié)合的能力。SPA結(jié)合部位是Fc段而不是Fab段,這種結(jié)合不會影響抗體的活性。SPA具有的結(jié)合力是雙價的,每個SPA分子可以
6、同時結(jié)合兩個IgG分子,也可一方面同IgG相結(jié)合,一方面與標(biāo)記物如熒光素、過氧化物酶、膠體金和鐵蛋白等相結(jié)合。還有一個饒有興趣的事實是,和SPA結(jié)合后的IgG可用4mol/L鳥嘌呤鹽酸鹽等使之解離。SPA對IgG免疫球蛋白亞型的結(jié)合有選擇性,如SPA與人IgG亞型:IgG1、IgG2、和IgG4有結(jié)合力,唯獨不結(jié)合IgG3。只結(jié)合IgA2,而不結(jié)合IgA1。SPA和禽類血清IgG不結(jié)合。(4)SPA具有多種生物學(xué)作用,如引起豚鼠解離體回腸和收縮,在吞噬反應(yīng)中抑制IgG調(diào)理素吞噬和殺菌作用,SPA—Igg
7、復(fù)合物能固定人的補體和人、狗、豬的新鮮補體,對人類B細胞具有促有絲分裂因子的作用等。應(yīng)用介紹凝固酶陰性葡萄球菌應(yīng)用SPA建立了許多敏感、特異性強、快速和簡易的實驗方法,并在許多方面的應(yīng)用中積累了實際應(yīng)用的材料,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用到免疫學(xué)及其相關(guān)科學(xué)如細胞學(xué)、細菌學(xué)和病毒學(xué)等。其可能應(yīng)用的范圍可歸納為以下四個方面:1.應(yīng)用于免疫球蛋白的制備和分析SPA是一種比較理想的提純和分析免疫球蛋白的試劑。由于SPA與IgG及其某些亞型的Fc段有較強的結(jié)合力,可利用來提純、分析免疫球蛋白制劑,結(jié)合后的PSA—IgG可再用解
8、離劑如4mol/L尿素、4mol/L,硫氰酸鹽或6mol/L的鳥嘌呤鹽酸鹽使之解離,多用SPA—Sepharose層析柱分離IgG或其亞型及斷片如Fc、Fab等。2.應(yīng)用于免疫細胞化學(xué)由于SPA具有雙價結(jié)合力,在免疫細胞化學(xué)技術(shù)中可作為橋抗體或標(biāo)記抗體。由于SPA能與多種動物的IgG的Fc段結(jié)合,因此,作為第二抗體或標(biāo)記抗體,SPA的最大優(yōu)點是不受種屬特異性的限制,故在目前各種免疫細胞化學(xué)技術(shù)中已得到廣泛的應(yīng)用。除不受種屬限制這一特點外,S