資源描述：
《金黃色葡萄球菌蛋白A單克隆抗體的制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2012年12月甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報第47卷第6期1～5JOURNAIOFGANSUAGRICULTURAlUNIVERSITY雙月刊金黃色葡萄球菌蛋白A單克隆抗體的制備彭洪江，杜惠芬，李克生，馬衛(wèi)靜杜麗娟，袁明，連曉雯(1．甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730070；2．甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院醫(yī)學(xué)生物中心，甘肅蘭州730050)摘要：為獲得穩(wěn)定性好、特異性強、效價較高的抗金黃色葡萄球菌蛋白A單克隆抗體，用熱滅活的金黃色葡萄球菌wol一04菌體抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞(SP2／0)融合，以金黃色葡萄
2、球菌蛋白A(SPA)為篩選抗原進行克隆篩選，并對各株單抗的生物學(xué)特性進行分析和鑒定．結(jié)果表明：試驗獲得了3株穩(wěn)定分泌SPA單克隆抗體的雜交瘤細胞，其中單克隆抗體3BII、4F7為SPA表面抗原表位的單克隆抗體，與金黃色葡萄球菌wol一04菌體和SPA有較強的免疫反應(yīng)性，免疫球蛋白亞類分別為IgG1和IgG3，具有穩(wěn)定性好、特異性強、效價較高的特點．關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌蛋白A；單克隆抗體；雜交瘤細胞；間接ELISA中圖分類號：S852．6文獻標志碼：A文章編號：1003—4315(2012)06—0001—05Monoclona
3、lantibodiesproductionagainstSZoc0aureusproteinAPENGHong-jiang，DUHui—fen，LIKe-sheng，MAWei-jing，DULi-juan~，YUANMing．LIANXiao—wed(1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Ianzhou730070，China；2．CenterofMedicalBiotechnology，GansuAcademyofMedicalSciences，L
4、a~hou730050，China)Abstract：Inordertoproducemonoclonalantibodies(McAbs)againstStaphylococcusaureusproteinA(SPA)，hybridomacellswereobtainedbyfusionofmyelomacellswithlymphocytesfromBALB／cmiceim—munizedwithheat—killedS．a(chǎn)ureuscells．PositivecloneswereselectedusingindirectE
5、LISAwithS．a(chǎn)ureusandSPAasantigens．TheresultsshowedthatsixMcAbsspecificforSPAofS．a(chǎn)ureuswereobtained．TwoofMcAbs，3Blland4F7wereprovedtobespecificandagglutinatedS．a(chǎn)ureuswol一04cellswel1．TheywereIgG1andIgG3subtype，withhighspecificity，stabilityandtiter．Keywords：Staphylococcu
6、saureusproteinA；monoclonalantibodies；hybridomacells；indirectELISA金黃色葡萄球菌(S口^0f0ccsaureus)是一監(jiān)控是世界性衛(wèi)生問題．金黃色葡萄球菌檢測技術(shù)種常見的引起食物中毒的主要病原菌，廣泛存在于繁多，其中以免疫學(xué)方法最為常用，而制備針對金黃自然環(huán)境中[．金黃色葡萄球菌對食品的污染極其色葡萄球菌的單克隆抗體是各種免疫檢測方法的基常見，每年由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例礎(chǔ)．葡萄球菌A蛋白(Staphylococcalaureuspro—僅次于沙門氏菌，金
7、黃色葡萄球菌在食物中的檢測teinA，SPA)是細胞壁抗原的主要成分，大約9O第一作者：彭洪~(1986一)，男，碩士研究生，研究方向為獸醫(yī)微生物與免疫．E-mail：jianNustdo@126．corn通信作者：李克生，男，博士，研究員，研究方向為獸醫(yī)微生物與免疫．E-mail：LksEm@sohu．com基金項目：甘肅省科教興省省長基金(GS024一A43021)．收稿日期：2012—01—09；修回日期：2012—04—052甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報以上的葡萄菌株均含有這種成分，且蛋白功能區(qū)高腹股溝皮下、背頸部皮下、足墊多點注射
8、免疫，每只度保守
9、3]．因此制備高特異性的抗SPA的單克隆抗小鼠注射0．2mL(菌量約10。cfu／只)，間隔3周后體，是診斷和檢測食品中是否含有金黃色葡萄球菌用弗氏不完全佐劑使用同樣方法加強免疫2次，抗的有效途徑．鑒于此，本試驗研究了如何制備高特異原濃度每次加
