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《人降鈣素原(pct)elisa試劑盒說明書》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、人降鈣素原(PCT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書廈門慧嘉生物科技有限公司本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!預期應用ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關生物液體中PCT含量。實驗原理用純化的PCT抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的PCT抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PCT呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1、酶標板
2、：一塊（96孔）2、標準品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2,000pg/ml，將其稀釋為1,000pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成1,000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，15.6pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/ml。如配制500pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1,000pg/ml的上述
3、標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。3、樣品稀釋液：1×20ml。4、檢測稀釋液A：1×10ml。5、檢測稀釋液B：1×10ml。6、檢測溶液A：1×120/瓶（1:100）。臨用前以檢測稀釋液A1:100稀釋（如：10檢測溶液A/990檢測稀釋液A），充分混勻，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（100/孔），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。7、檢測溶液B：1×120/瓶（1:100）。臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。8、底物溶液：1×10ml
4、/瓶。9、濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10、終止液：1×10ml/瓶（2mol/LH2SO4）。11、覆膜：5張12、使用說明書：1份自備物品1、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）2、微量加液器及吸頭，EP管3、蒸餾水或去離子水，濾紙標本的采集及保存1、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80保存，但應避免反復凍融。2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于1000g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80
5、保存，但應避免反復凍融。3、其它生物標本：請1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20或-80保存，但應避免反復凍融。注：以上標本均應密封保存，4保存應小于1周，-20不應超過1個月，-80不應超過2個月；標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。操作步驟實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。1、加樣：分別設空白孔
6、、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00，余孔分別加標準品或待測樣品100，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100（臨用前配制），酶標板加上覆膜，37溫育1小時。3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。4、每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時。5、棄去孔內(nèi)液體
7、，甩干，洗板5次，方法同步驟3。6、每孔加底物溶液90，酶標板加上覆膜37避光顯色（反應時間控制在15-30分鐘，當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。7、每孔加終止溶液50，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。8、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（值）。注：1、試劑準備：所有試劑在使用前應平衡至室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。2、加樣：加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，
8、將會導致不同的“預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設置復孔進行實驗。3、溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時將加上蓋或
