豬流感病毒(h亞型)elisa抗體檢測試劑盒等種 獸藥產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、...

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1、附件2（略）附件3豬流感病毒（H1亞型）ELISA抗體檢測試劑盒等2種獸藥產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和內(nèi)包裝標(biāo)簽一、豬流感病毒（H1亞型）ELISA抗體檢測試劑盒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、說明書和標(biāo)簽（一）豬流感病毒（H1亞型）ELISA抗體檢測試劑盒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)豬流感病毒（H1亞型）ELISA抗體檢測試劑盒Zhuliuganbingdu（H1Yaxing）ELISAKangtijianceShijiheELISAKitforSwineInfluenzaVirus（H1Subtype）AntibodyDetection本試劑盒系用H1亞型豬流感病毒血凝素（HA）基因的原核表達(dá)產(chǎn)物包被的酶聯(lián)反應(yīng)板、陰性對照血清

2、、陽性對照血清、羊抗豬酶標(biāo)二抗、樣品稀釋液、底物液A、底物液B、20倍濃縮洗滌液、終止液、血清稀釋板等組裝而成。用于檢測H1亞型豬流感病毒血清抗體?！拘誀睢吭噭┖械耐獍b應(yīng)潔凈、無破損，內(nèi)包裝應(yīng)無破損、無裂痕、無滲漏，品名、批號、保存條件、有效期清晰。其中：豬流感病毒（H1亞型）ELISA抗原包被板包裝膜封閉良好，孔底清潔透明，無異物，96孔/塊，2塊/盒。豬流感病毒（H1亞型）陰性對照血清淡黃或淡紅色液體，無臭、無味，有時有少量懸浮物，裝量為2ml/管，2管/盒。豬流感病毒（H1亞型）陽性對照血清淡黃或淡紅色液體，無臭、無味，有時有少量懸浮物，裝量為2ml/管，2管/盒。羊抗豬酶標(biāo)

3、二抗無色澄清液體，無臭、無味，無沉淀物，裝量為20ml/瓶，1瓶/盒。樣品稀釋液無色液體，無臭、無味，有時有少量沉淀物，裝量為50ml/瓶，1瓶/盒。底物液A無色澄清液體，無臭、無味，無沉淀物，裝量為10ml/瓶，1瓶/盒。底物液B無色澄清液體，無臭、無味，無沉淀物，裝量為10ml/瓶，1瓶/盒。20倍濃縮洗滌液無色澄清液體，無臭、無味，無沉淀物，裝量為30ml/瓶，1瓶/盒。終止液無色澄清液體，無臭、無味，無沉淀物，裝量為10ml/瓶，1瓶/盒。血清稀釋板孔底清潔透明，無異物，96孔/塊，2塊/盒。【無菌檢驗】按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄對陽性對照血清、陰性對照血清、羊抗豬酶標(biāo)二抗進(jìn)行

4、檢驗，均應(yīng)無菌生長。【敏感性檢驗】將陽性質(zhì)控血清（見附注1）按1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640進(jìn)行2倍系列稀釋后，分別取100μl加入抗原包被板各相應(yīng)孔中，同時設(shè)陽性對照和陰性對照（不用稀釋）各2孔，空白對照1孔，輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃下孵育30分鐘。其余操作方法按“用法與判定”1.5.2～2項進(jìn)行，不同稀釋倍數(shù)的陽性質(zhì)控血清應(yīng)符合下列標(biāo)準(zhǔn)：陽性質(zhì)控血清稀釋倍數(shù)OD630nm值1:5≥P×0.25+1.11:10≥P×0.25+0.91:20≥P×0.25+0.71:40≥P×0.25+0.51:80≥P×0.25+0.

5、31:160≥P×0.25+0.21:320≥P×0.25+0.11:640≥P×0.25注：P為試劑盒的兩個陽性對照血清孔OD630nm的平均值。【特異性檢驗】按照“用法與判定”對30份陰性質(zhì)控血清（包括豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬、豬萎縮性鼻炎、豬傳染性胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌、豬口蹄疫、豬瘟、豬弓形蟲、豬水皰性口炎、豬衣原體、豬流感病毒H3亞型、豬流感病毒H9亞型及大腸桿菌工程菌株免疫的陽性血清各2份，豬流感病毒H1亞型抗體陰性豬血清4份，見附注2）進(jìn)行檢測和判定，均應(yīng)為陰性。【用法與判定】1用法1.1樣品準(zhǔn)備取動物全血，待血液凝固后，以4000r/min離心10分鐘，收集上清。

6、也可采集血液，待凝固后自然析出血清。要求血清清亮，無溶血。1.2洗滌液配制使用前，將20倍濃縮洗滌液恢復(fù)至室溫（20～25℃），并搖動使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用蒸餾水作20倍稀釋（例如：每兩塊板用30ml的20倍濃縮洗滌液加上570ml蒸餾水），混勻后即可使用。稀釋好的洗滌液在2～8℃可存放7日。1.3樣品稀釋在血清稀釋板中用樣品稀釋液按1:40的比例稀釋待檢血清（例如：195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清）。1.4對照不需要稀釋，直接使用。1.5操作步驟1.5.1取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），先用洗滌液洗板1次，再將稀釋好的待檢血清

7、取100μl加入到抗原包被板孔中。同時設(shè)2孔陰性對照、2孔陽性對照及1孔空白對照，輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃下孵育30分鐘。1.5.2甩掉反應(yīng)孔中的溶液，每孔用約200μl洗滌液洗滌5次，每次靜置3分鐘后倒掉洗滌液，并在干凈的吸水紙上拍干。1.5.3每個反應(yīng)孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl，置37℃下孵育30分鐘。1.5.4洗滌5次，方法同1.5.2。1.5.5每個反應(yīng)孔加底物液A和底物液B各1滴（約50μl），混勻，室溫避光顯色10分鐘。1.5.6