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《wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和標(biāo)記作者：趙科研柳克祥侯明曉孫江濱吳慧穎李博【摘要】 目的建立Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）分離、培養(yǎng)的方法，并進(jìn)行鑒定、標(biāo)記。方法采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠的MSCs。采用相差顯微鏡觀察MSCs的形態(tài)學(xué)特征；流式細(xì)胞儀檢測第3代細(xì)胞表面標(biāo)志抗原CD29、CD44、CD34和CD45的表達(dá)率；電鏡檢查第3代MSCs超微結(jié)構(gòu)。DAPI標(biāo)記MSCs為下一步進(jìn)行體內(nèi)細(xì)胞移植示蹤。結(jié)果原代培養(yǎng)的MSCs于6～8h后貼壁，6d左右形成集落，1
2、4d左右可達(dá)到80%～90%融合。第3代細(xì)胞表面標(biāo)記物CD29，CD44，CD34和CD45的陽性率分別為98.6%，78.2%，0.0%，0.3%。超微結(jié)構(gòu)清晰，可見細(xì)胞器，如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體，細(xì)胞核呈圓形或不規(guī)則，可見較多微絨毛。DAPI可良好標(biāo)記MSCs細(xì)胞核，呈藍(lán)色熒光。結(jié)論采用全骨髓貼壁培養(yǎng)的方法能夠成功分離和培養(yǎng)大鼠的MSCs，在第3代可獲得高純度MSCs。DAPI可以作為一種示蹤劑標(biāo)記MSCs。9【關(guān)鍵詞】細(xì)胞培養(yǎng)；間充質(zhì)干細(xì)胞；種子細(xì)胞；示蹤劑【Abstract】Ob
3、jectiveToestablishamethodforisolationandcultureofbonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs)fromWistarratsinvitro,andtoidentifycharacteristicofthecellsandtolabelthemaftercultureexpansion.MethodsMSCswereisolatedandcultivatedfromthebonemarrowofWistarratsbyadher
4、entmethod.ThemorphologyofMSCswasobservedunderphasecontrastmicroscope.TheexpressionofCD29,CD44,CD34andCD45ofthethirdgenerationcellswereanalyzedbyflowcytometry.ElectronmicroscopicfeatureswerealsoobservedandMSCswerelabeledbyDAPI.ResultsAfter6to8hprimarycu
5、lture,MSCsadheredtoplasticsurfaceoftheculturedish. About6dlater,thecellsproliferatedincolonies.PrimaryMSCsreached80%～90%ofconfluencein14dapproximately.ThepositiveratesofCD29,CD44,CD34,andCD45inMSCsatthirdgenerationwere98.6%,78.2%,0.0%,and0.3%respective
6、ly.UndertheelectronmicroscopeMSCshadplentifulcytoplasmwithmitochondriaroughendoplasmicreticulaandGolgicomplexes.Theirnucleiwereroundorirregularandtherewereplentyofmicrovillionthesurface.AlloftheMSCsafterlabelingbyDAPIshowedbluefluorescencebyfluoroscope
7、.ConclusionsMesenchymalstemcells9canbesuccessfullyisolatedandcultivatedbyadherentmethod.AndhigherpurityMSCscanbepickedupaftercultureexpansionatP3.DAPIcanbeaneffectivetraceragenttolabelMSCs.【Keywords】Cellculture;Mesenchymalstemcells;Seedcells;Traceragen
8、t 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是一類具有自我更新和多向分化潛能的非造血干細(xì)胞，可以向骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、干細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及心肌細(xì)胞分化〔1，2〕，具有高度可塑性，易于體外擴(kuò)增，因其來源充足、取材方便，體外增殖能力相對較強(qiáng)，而且在異體移植中排斥反應(yīng)小，被認(rèn)為是組織工程和基因工程的理想種子細(xì)胞，為心血管疾病、神經(jīng)疾病和骨關(guān)節(jié)疾病的治療提供了一條全新的治療方案。本文在總結(jié)貼壁分離法培養(yǎng)MSCs的基礎(chǔ)上，優(yōu)化MS
