臨床檢驗(yàn)中的發(fā)光免疫分析

《臨床檢驗(yàn)中的發(fā)光免疫分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、臨床檢驗(yàn)中的發(fā)光免疫分析由于化學(xué)反應(yīng)（通常是氧化）或生物化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生電子能級(jí)處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過躍遷釋放能量并產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。與熒光最大的區(qū)別在于無(wú)需激發(fā)光，因此后者也被稱為光致發(fā)光。發(fā)光（Luminescence）化學(xué)發(fā)光（Chemiluminescence）生物發(fā)光（Bioluminescence）生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光均屬于冷光，即發(fā)光不是由于發(fā)光體溫度升高所致，因此其反應(yīng)能量絕大部分用于發(fā)光而不是發(fā)熱，發(fā)射波長(zhǎng)也與溫度無(wú)關(guān)。發(fā)光測(cè)定屬發(fā)射光譜分析，多采用動(dòng)力/速率法或積分法，無(wú)需終止反應(yīng)，也不受朗伯-比爾定律限制；而酶標(biāo)顯色測(cè)定屬吸收光譜分析，多采用終

2、點(diǎn)法，需終止反應(yīng)，并受朗伯-比爾定律限制。按化學(xué)反應(yīng)類型化學(xué)發(fā)光的分類酶促化學(xué)發(fā)光：辣根過氧化物酶系統(tǒng)堿性磷酸酶系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)非酶促化學(xué)發(fā)光：吖啶酯系統(tǒng)草酸酯系統(tǒng)三價(jià)鐵-魯米諾系統(tǒng)閃光（Flash）:按發(fā)光持續(xù)時(shí)間發(fā)光時(shí)間在數(shù)十分鐘以上，如：HRP-Luminol系統(tǒng)AP-AMPPD系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)無(wú)須原位進(jìn)樣、以速率法測(cè)量。發(fā)光時(shí)間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯以原位進(jìn)樣(InSituInjector)和時(shí)間積分法測(cè)量輝光（Glow）:時(shí)間發(fā)光信號(hào)輝光坪區(qū)速率法測(cè)量原位進(jìn)樣積分法測(cè)量閃光尖峰閃光與輝光及其測(cè)量方式的差別魯米諾及其衍生物的增敏化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)H2O2+NH2OONHN

3、HN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon(425nm)ROHROHNSRBOHOH增強(qiáng)劑（Enhancer）商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（一）AMPPD及其衍生物的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（二）CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商業(yè)化產(chǎn)品中常見的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)（三）吖啶酯化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)發(fā)光檢測(cè)的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線信號(hào)強(qiáng)度（Y）實(shí)際曲線標(biāo)記物濃度（X）理論/校正

4、曲線由于：不同發(fā)光體系和免疫分析模式具有不同的實(shí)際信號(hào)曲線因此：科學(xué)準(zhǔn)確的特定校正技術(shù)是衡量設(shè)備和試劑匹配性的關(guān)鍵發(fā)光信號(hào)檢測(cè)光敏二極管、光敏電池、光電偶合器（CCD）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、性能穩(wěn)定但靈敏度低、線性范圍較窄。主要特點(diǎn)原理：光信號(hào)光電轉(zhuǎn)換器件電壓或電流信號(hào)放大單光子計(jì)數(shù)器是目前高靈敏度發(fā)光分析儀的核心部件光電倍增管高壓高速放大器高速比較器高速分頻器發(fā)光樣品產(chǎn)生光子激發(fā)光陰極產(chǎn)生光電子在陽(yáng)極上形成較強(qiáng)信號(hào)脈沖信號(hào)相對(duì)發(fā)光單位數(shù)字脈沖(RLU)在各打拿極之間得到能量和數(shù)目的倍增單光子計(jì)數(shù)器的工作特性光子計(jì)數(shù)（Y）發(fā)光強(qiáng)度（X）飽和點(diǎn)理論/校正曲線實(shí)際計(jì)數(shù)曲線由于：?jiǎn)喂庾佑?jì)數(shù)是在檢

5、測(cè)隨機(jī)光子事件因此：隨光子數(shù)量增多檢測(cè)效率持續(xù)下降所以：準(zhǔn)確的校正技術(shù)是設(shè)備品質(zhì)的關(guān)鍵模擬（光電流）測(cè)量曲線單光子計(jì)數(shù)式發(fā)光檢測(cè)儀計(jì)算機(jī)打印機(jī)發(fā)光儀控制模塊發(fā)光儀執(zhí)行模塊控制器程控高壓計(jì)數(shù)/貯存器單光子計(jì)數(shù)器樣品運(yùn)動(dòng)/定位裝置程控自動(dòng)門鎖及檢測(cè)裝置原位注射泵光生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用范圍軍事偵測(cè)公安稽查衛(wèi)生檢疫藥物篩查醫(yī)學(xué)診斷環(huán)境檢測(cè)航天遙感生命科學(xué)……已成為現(xiàn)代生物技術(shù)最活躍的領(lǐng)域之一光生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)越性徹底消除了放射性危害無(wú)半衰期限制，試劑穩(wěn)定性和有效期大大延長(zhǎng)容易實(shí)現(xiàn)連續(xù)、動(dòng)態(tài)、重復(fù)測(cè)定適合于復(fù)合標(biāo)記系統(tǒng)進(jìn)行多指標(biāo)并行測(cè)定操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)速度快，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化靈敏度和線性范圍超

6、過以往技術(shù)幾種標(biāo)記/檢測(cè)技術(shù)理論極限靈敏度的比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光靈敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9幾種標(biāo)記/檢測(cè)技術(shù)理論線性范圍的比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光線性范圍105104103102幾種標(biāo)記/檢測(cè)試劑的有效期比較酶標(biāo)熒光放免發(fā)光有效期（月）1815129630020,00040,00060,00080,000100,000試劑盒儀器特殊防護(hù)治理污染人民幣人民幣三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用三種免疫測(cè)定技術(shù)的成本及費(fèi)用放免酶標(biāo)發(fā)光夾心法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線信號(hào)強(qiáng)度（Y）線性范圍待測(cè)物濃度（X）Hook(前滯)效應(yīng)分析靈敏度（最低檢測(cè)限）（95%可信度）：S

7、0+2SD在該曲線上所對(duì)應(yīng)的濃度值。功能靈敏度：測(cè)定誤差（變異）≤20%的最低可檢測(cè)濃度。線性范圍：（分析）功能靈敏度---變異≤20%的最高檢測(cè)濃度相關(guān)系數(shù)≥0.99的曲線范圍競(jìng)爭(zhēng)法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線待測(cè)物濃度（X）信號(hào)強(qiáng)度（Y）線性范圍分析靈敏度（最低檢測(cè)限）（95%可信度）：S0-2SD在該曲線上所對(duì)應(yīng)的濃度值功能靈敏度：測(cè)定誤差（變異）≤20%的最低可檢測(cè)濃度線性范圍：（分析）功能靈敏度---變異≤20%的最高檢測(cè)濃度相關(guān)系數(shù)≥0.99的曲線范圍發(fā)光免疫分析技術(shù)的現(xiàn)狀及應(yīng)注意的問