化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用ppt課件

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1、內(nèi)容提要免疫檢測技術(shù)概述化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)簡述化學(xué)發(fā)光診斷技術(shù)在臨床中的應(yīng)用第一部分免疫檢測技術(shù)概述定義免疫學(xué)檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測的一種手段。它可以利用同位素（熒光素）酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號進(jìn)行放大和顯示。夾心法競爭法間接法免疫檢測常用方法放射免疫診斷技術(shù)（RIA）酶聯(lián)免疫診斷技術(shù)（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)（CLIA）20世紀(jì)60年代70年代80年代90年代2000年2020年時間臨床免疫診斷技術(shù)的發(fā)展基本歷經(jīng)了以下三個階段：化學(xué)發(fā)光（CLIA）酶免（EIA）放免（RIA）靈敏度（M/L）10-17-10-1910-1510

2、-15-10-16標(biāo)記物酶蛋白或發(fā)光物質(zhì)酶蛋白放射性元素靈敏度高低高線性范圍寬窄寬放射污染無無有試劑穩(wěn)定性12個月6-12個月1-3個月操作易易繁瑣1.興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)已被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法；2.產(chǎn)品處于成熟期。1.導(dǎo)入于20世紀(jì)90年代，現(xiàn)較大醫(yī)院開展個別項(xiàng)目；2.產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長期?；瘜W(xué)發(fā)光1.興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用；2.產(chǎn)品處于衰退期。1.興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)普遍使用，為我國臨床免疫診斷的基本方法；2.產(chǎn)品處于成熟期。酶聯(lián)免疫1.興起于20世紀(jì)60年代，現(xiàn)已基本退出臨床應(yīng)用；2.產(chǎn)品生命周期已終結(jié)；3

3、.廠商試劑和儀器共同開發(fā)。1.興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院；2.產(chǎn)品處于衰退期；3.廠商試劑與儀器共同開發(fā)。放射免疫歐美中國免疫診斷現(xiàn)狀當(dāng)前進(jìn)展國際：國際上排名前六位的診斷巨頭企業(yè)均投入了大量的資金和人力進(jìn)行化學(xué)發(fā)光技術(shù)的研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化國內(nèi)：只有一兩家科研機(jī)構(gòu)及企業(yè)在進(jìn)行相關(guān)問題的比較深入研究，但發(fā)展較快中國免疫診斷現(xiàn)狀中國臨床免疫定量診斷現(xiàn)狀亟待改善化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)已成為免疫定量診斷的主流昂貴的成本價格嚴(yán)重阻礙化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)造福中國人民臨床呼喚符合國情的解決方案中國即將迎來免疫定量診斷技術(shù)普及的新高潮第二部分化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)化學(xué)

4、發(fā)光技術(shù)概述化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，是將化學(xué)發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測定技術(shù)。其特點(diǎn)在于靈敏度高、測定范圍寬、快速、簡便，并且在測試中不使用有害的試劑，無污染。類型化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析電化學(xué)發(fā)光分析時間分辨免疫熒光分析四種檢測方法比較技術(shù)類型標(biāo)記、反應(yīng)體系主要優(yōu)點(diǎn)主要不足化學(xué)發(fā)光吖啶酯過氧化氫靈敏度較高試劑成本高，發(fā)光時間短，測量方式復(fù)雜（積分法），需原位進(jìn)樣（InSituInjector）儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高化學(xué)發(fā)光酶免疫分析辣根酶魯米諾堿性磷酸酶AMPPD測量方式簡單、成本較低、靈敏度較高不同次試驗(yàn)中，曲

5、線有漂移時間分辨熒光銪（Eu）、鏑（Dy）、釤（Sm）、鋱（Tb）等絡(luò)合物脈沖光源激發(fā)靈敏度較高、試劑較穩(wěn)定試劑成本較高測量方式復(fù)雜（脈沖激發(fā)、流動池）儀器成本及維護(hù)費(fèi)用高環(huán)境及樣品中同類元素可導(dǎo)致本底干擾電化學(xué)發(fā)光釕（Ru）的絡(luò)合物靈敏度較高、試劑較穩(wěn)定化學(xué)發(fā)光酶免疫分析用參與某一發(fā)光反應(yīng)的酶來標(biāo)記抗原或抗體，免疫反應(yīng)后，加入發(fā)光試劑，測定發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度來確定抗原或抗體的含量。兩大體系辣根過氧化物酶（HRP）體系堿性磷酸酶(AP)體系堿磷酶發(fā)光信號示意圖Time?Signal?辣根酶發(fā)光信號示意圖兩大體系的比較堿磷酶體系：水解反應(yīng)，起光較慢，發(fā)光強(qiáng)度較

6、弱，靈敏度較高。辣根酶體系：氧化還原反應(yīng)，起光較快，發(fā)光強(qiáng)度較大。第三部分化學(xué)發(fā)光診斷技術(shù)在臨床中的應(yīng)用化學(xué)發(fā)光在臨床檢測中的主要應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物檢測甲狀腺功能檢測生殖內(nèi)分泌激素系列糖尿病檢測傳染病檢測系列肝纖維化系列一、腫瘤標(biāo)志物的檢測1、腫瘤標(biāo)志物（tumormarker，TM）是指由腫瘤組織產(chǎn)生的存在于腫瘤組織本身，或分泌至血液或其他體液，或是因腫瘤組織刺激，由宿主細(xì)胞產(chǎn)生的反映腫瘤的存在和生長，含量明顯高于正常參考值的一類物質(zhì)。通過對這類物質(zhì)的分析，能幫助人們從正常組織中區(qū)別腫瘤或測定腫瘤細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)以及對細(xì)胞膜上的特性進(jìn)行分析，以此作為辨認(rèn)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)

7、志。2、腫瘤標(biāo)志物的分類（1）、腫瘤胚胎性抗原標(biāo)志物該類蛋白質(zhì)即前文所提到的因返祖現(xiàn)象的出現(xiàn)，而產(chǎn)生的腫瘤標(biāo)志物。雖然該類標(biāo)志物與腫瘤組織不一定具有特定的相關(guān)性，但與腫瘤的發(fā)生存在著內(nèi)在的聯(lián)系。例：甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）癌胚抗原（carcinoembryonicantigen,CEA）（2）、糖類抗原標(biāo)志物該類物質(zhì)是腫瘤細(xì)胞表面的抗原物質(zhì)，或腫瘤細(xì)胞所分泌的物質(zhì)。這類標(biāo)志物的出現(xiàn)為臨床腫瘤的診斷帶來方便，但其命名無規(guī)律可言。有些是腫瘤細(xì)胞株編號，有些是抗體物質(zhì)的編號。該類標(biāo)志物又可分為兩類①糖類高分子粘蛋白抗原例：癌抗原CA125癌

8、抗原CA1