nm23基因在人肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

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1、nm23基因在人肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義【摘要】目的：觀察nm23基因在人肺癌中的表達(dá)，探討其與肺癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)UltrasensitiveTMSP三步法，檢測(cè)49例肺癌及40例癌旁正常組織肺切片中nm23蛋白表達(dá)的情況，結(jié)合臨床資料，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)其與肺癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果：在49例肺癌組織中，nm23蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為55.1%，顯著低于正常肺組織的87.5%(P<0.01);在病理分級(jí)高中分化、低分化和未分化癌組織中nm23蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.6%、41.2%和11.1%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

2、1);在不同年齡、性別、吸煙指數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期中，nm23蛋白表達(dá)情況的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：：nm23蛋白的表達(dá)水平隨肺癌組織分化程度升高而增加，而與肺癌轉(zhuǎn)移抑制作用可能無(wú)關(guān)【關(guān)鍵詞】免疫組織化學(xué);肺癌;nm23基因;組織分化程度9肺癌已成為人類癌癥死亡的主要原因之一。在我國(guó)，肺癌發(fā)病率及死亡率增長(zhǎng)迅速。癌癥的預(yù)后與診斷時(shí)的臨床分期密切相關(guān)。肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段發(fā)生、長(zhǎng)時(shí)間形成的極其復(fù)雜的病變過(guò)程。nm23基因是近年來(lái)研究較多的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因之一，但是目前，nm23基因的蛋白直接或間接調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程的機(jī)制仍未明確，nm23蛋白的表

3、達(dá)與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后關(guān)系的結(jié)論也不明確。本研究通過(guò)檢測(cè)肺癌患者癌組織中nm23蛋白的表達(dá)與肺癌臨床生物學(xué)行為間的關(guān)系，為進(jìn)一步探討肺癌的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)，推測(cè)其可能的作用機(jī)制?！　?材料與方法　　1.1標(biāo)本來(lái)源　　選取西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院1998年3月～2004年12月經(jīng)手術(shù)切除或氣管鏡活檢的63例肺癌，去除資料不全病例，取術(shù)前未進(jìn)行放療和(或)化療、無(wú)其他疾病或并發(fā)癥及臨床資料齊全的病例49例用于本研究。其中男33例，女16例;年齡34～72歲,平均(59.2±11.3)歲。按1981年WHO肺癌病理類型分類標(biāo)準(zhǔn)：鱗癌19例，腺癌20例，小細(xì)胞癌10例;分化程度：

4、高中分化23例，低分化17例，未分化9例。按美國(guó)聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)(AJCC)和國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中Ⅰ期15例，Ⅱ期13例，Ⅲ+Ⅳ期21例;有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例。對(duì)原HE切片進(jìn)行復(fù)習(xí)，調(diào)取存檔石蠟包埋組織標(biāo)本，每例標(biāo)本均經(jīng)病理科有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師選擇1～2塊，制成4μm厚連續(xù)切片4張，3張切片供免疫組化染色，1張供HE染色復(fù)核診斷。取40例癌旁正常肺組織作為對(duì)照。9　　1.2方法　　病例標(biāo)本為病灶中央常規(guī)取材，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片厚約4μm。采用免疫組化UltrasensitiveTMSP三步法檢測(cè)nm23蛋白的表達(dá)。

5、　　1.3質(zhì)量控制　　每次染色均設(shè)計(jì)對(duì)照，以作為染色質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性對(duì)照采用已知的陽(yáng)性對(duì)照片(購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)，空白對(duì)照采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗，所有對(duì)照均與實(shí)驗(yàn)標(biāo)本在相同條件下嚴(yán)格按照實(shí)際和推薦方法進(jìn)行染色。　　1.4判定標(biāo)準(zhǔn)　　免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞漿或細(xì)胞核中有黃色顆粒。蛋白累積的評(píng)分方法：參照Fromwitz綜合計(jì)分法并略加修改行半定量分析，在高倍鏡(10×40)下，隨機(jī)選擇5～10個(gè)不同的視野各計(jì)數(shù)10～20個(gè)癌細(xì)胞，約100個(gè)癌細(xì)胞，記錄陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和染色特征。陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)計(jì)算公式：陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)=(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總癌細(xì)胞數(shù))×9100%

6、。陽(yáng)性百分率5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。著色強(qiáng)度以多數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色計(jì)分，淺棕色為1分，棕色為2分，深棕色為3分。行綜合評(píng)分，0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中度陽(yáng)性(++)，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。讀片在2位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師指導(dǎo)下進(jìn)行，有爭(zhēng)議的結(jié)果由3位醫(yī)師共同討論決定?！　?.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　　應(yīng)用SPSS11.5forWindows統(tǒng)計(jì)軟件包行卡方檢驗(yàn)和Fisher確切概率法，結(jié)果均以雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　?結(jié)果　　2.1nm23蛋白在正常肺組織及肺癌中的表達(dá)　　nm

7、23在正常肺組織及肺癌組織中陽(yáng)性率分別為87.5%、55.1%(P<0.01)。nm23蛋白陽(yáng)性表達(dá)為胞漿有棕黃色顆粒，以癌巢邊緣和散在的癌細(xì)胞表達(dá)較多，染色較深(圖1)。nm23蛋白在鱗癌中以弱中度陽(yáng)性為主，在腺癌中以中度陽(yáng)性為主，小細(xì)胞癌則以弱陽(yáng)性為主(圖2)。結(jié)果顯示在肺癌中nm23蛋白表達(dá)水平明顯降低(表1)。　　2.2nm23蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理特征的關(guān)系9　　由表2可以看出，在不同的年齡、性別、吸煙指數(shù)、組織學(xué)類型及TNM