參貞合劑對(duì)s180荷瘤小鼠t細(xì)胞免疫功能的影響

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1、參貞合劑對(duì)S180荷瘤小鼠T細(xì)胞免疫功能的影響【摘要】　　目的研究參貞（人參、黃芪、女貞子）合劑對(duì)S180荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用。方法小鼠胃飼參貞合劑，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群變化，MTT法檢測(cè)荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞增殖能力，ELISA法檢測(cè)IL2誘生量。結(jié)果胃飼參貞合劑使荷瘤小鼠的T淋巴細(xì)胞亞群、增殖能力和IL2產(chǎn)生量均有明顯提高(P＜0.05)。結(jié)論參貞合劑對(duì)荷瘤小鼠免疫功能有正向調(diào)節(jié)作用，將其研制成提高腫瘤患者免疫功能的藥物具有良好的前景。【關(guān)鍵詞】參貞合劑；荷瘤小鼠；免疫調(diào)節(jié)　　參貞合劑由中藥人參、黃芪、女貞

2、子三味中藥組成，研究表明人參、黃芪與女貞子均可提高機(jī)體的免疫功能，并具有抗腫瘤作用〔1，2〕。為探討上述3種藥合用對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響，筆者觀察了參貞合劑對(duì)荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用，為進(jìn)一步開發(fā)利用參貞合劑提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也為中藥治療腫瘤的臨床應(yīng)用提供新的思路?！　?材料與方法　　1.1材料6　　刀豆蛋白A（ConA,Sigma公司)、IMDM培養(yǎng)基(GiBco公司)、標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院灝洋生物)、淋巴細(xì)胞分離液(上海恒信化學(xué)試劑有限公司)、噻唑藍(lán)(MTT，AMRESCO公司)、ELISA試劑盒（R＆D公司）、單克

3、隆抗體CD3,CD4，CD8試劑盒(華美生物公司)。參貞合劑由本實(shí)驗(yàn)室配制。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明種雄性小鼠，體重18～20g，購(gòu)自長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心?！　?.2方法　　小鼠隨機(jī)分成2組，每組10只。腹腔接種S180瘤細(xì)胞，于接種同時(shí)參貞合劑組以參貞合劑胃飼（按53g/kg），生理鹽水組胃飼等量生理鹽水。連續(xù)胃飼10d后取材?！　?.2.1T淋巴細(xì)胞亞群的測(cè)定　　流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)荷瘤鼠脾臟CD3+T、CD4+T、CD8+T細(xì)數(shù)量、CD4/CD8比值，將小鼠頸椎脫臼處死,常規(guī)制備脾細(xì)胞懸液；TrisNH4Cl溶脹紅細(xì)胞，計(jì)數(shù)，取106個(gè)細(xì)

4、胞(200μl體積)，加入熒光標(biāo)記CD3、CD4、CD8抗體，避光冰浴45min，冷PBS洗滌2次后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟CD3+T、CD4+T、CD8+T細(xì)胞數(shù)量。6　　1.2.2T淋巴細(xì)胞增殖能力的測(cè)定　　依文獻(xiàn)〔3，4〕方法：服用參貞合劑組小鼠于停藥后次日，與生理鹽水對(duì)照組小鼠同時(shí)眼球放血處死，無菌取脾臟，制備脾臟細(xì)胞懸液，以完全I(xiàn)MDM培養(yǎng)液稀釋。鏡下計(jì)數(shù)脾細(xì)胞，調(diào)脾細(xì)胞濃度至5×106/ml。取0.1%臺(tái)盼藍(lán)溶液1滴加4滴細(xì)胞懸液，觀察活細(xì)胞數(shù)>95％。將不同組別的脾細(xì)胞懸液置于96孔培養(yǎng)板中100μg/孔，加入ConA1

5、00μg/孔，終濃度為5μg/ml。置CO2培養(yǎng)箱孵育48h，取出用倒置顯微鏡觀察其細(xì)胞增殖情況。見有轉(zhuǎn)化的大淋巴母細(xì)胞，即脾淋巴細(xì)胞已進(jìn)入對(duì)數(shù)分裂期。每孔加入5mg/mlMTT10μl/孔，置CO2培養(yǎng)箱孵育6h后取出，貼壁吸上清液100μl棄之，加入DMSO100μl/孔，充分振蕩后，靜止10min，酶標(biāo)儀測(cè)定（570nm）。　　1.2.3IL2分泌能力檢測(cè)　　無菌取脾細(xì)胞懸液，采用ELISA方法檢測(cè)脾細(xì)胞上清IL2含量，具體方法參照說明書進(jìn)行?！　?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析　　采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s表示,定量資料

6、采用t檢驗(yàn),并進(jìn)行單因素方差分析及組間均數(shù)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析?！　?結(jié)果6參貞合劑組荷瘤鼠CD3、CD4、CD4/CD8、T淋巴細(xì)胞及IL2水平明顯較生理鹽水組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)。見表1。表1參貞合劑對(duì)荷瘤鼠T細(xì)胞亞群、T細(xì)胞增殖能力和IL2水平的影響(略)　　3討論目前臨床應(yīng)用的抗腫瘤化學(xué)合成藥物雖然抗癌作用確切,療效顯著,但不良反應(yīng)大,長(zhǎng)期應(yīng)用易產(chǎn)生耐藥性。中醫(yī)藥治療腫瘤已成為腫瘤治療的主要療法之一，并漸顯其優(yōu)越性。特別是一些中藥的抑瘤作用和作為生物調(diào)節(jié)劑激活機(jī)體免疫細(xì)胞殺傷腫瘤作用的報(bào)道屢見不鮮，但其在抗腫

7、瘤機(jī)制方面的研究還有待進(jìn)一步探討。女貞子是木樨科植物女貞的干燥成熟果實(shí),性味甘、微苦、涼,歸肝、腎經(jīng),具有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)等功能，有報(bào)道女貞子有養(yǎng)心安神之功，女貞子多糖對(duì)機(jī)體的造血系統(tǒng)與免疫功能有調(diào)節(jié)作用〔5〕，女貞子提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞有一定的抑制作用〔6〕。人參具有大補(bǔ)元、益精生血之功效，對(duì)免疫功能亦有增強(qiáng)作用〔7，8〕，黃芪有補(bǔ)氣升陽作用〔9〕。本研究結(jié)果證明，參貞合劑對(duì)荷瘤小鼠T細(xì)胞增殖能力和IL2產(chǎn)生量有上調(diào)作用。6機(jī)體免疫功能失常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素，提高腫瘤病人的免疫機(jī)能是腫瘤免疫治療的重要方面，本研究為黃芪、女貞子、人

8、參合用提高腫瘤患者免疫功能提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，提示該藥物組合具有良好的應(yīng)用前景?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】　　1張鵬霞,趙蕾,王昭,等.女貞子血清藥理對(duì)HeLa細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.腫瘤，2006；26(16)