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《地塞米松對小鼠min6細(xì)胞增殖和凋亡的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、地塞米松對小鼠MIN6細(xì)胞增殖和凋亡的影響作者：林益川王林曦王燕萍王麗靜劉小鶯劉曉紅劉禮斌【摘要】 目的探討地塞米松對小鼠胰島β細(xì)胞株MIN6細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法實(shí)驗(yàn)分對照組和不同濃度地塞米松（50，100，200，400，800nmol/L）組誘導(dǎo)刺激MIN6細(xì)胞1～4d，MTT法觀察地塞米松作用后細(xì)胞的存活率；hochest/PI染色熒光顯微鏡觀測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果地塞米松作用1～4d可明顯抑制MIN6細(xì)胞的生長；>100nmol/L組的地塞米松處理48h后，細(xì)胞凋亡明顯，凋亡率高達(dá)（30.44±4.52）%，與對照組
2、比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），800nmol/L組地塞米松使細(xì)胞由凋亡轉(zhuǎn)向壞死。結(jié)論地塞米松對小鼠MIN6細(xì)胞增殖有明顯影響，并能夠引起MIN6細(xì)胞凋亡。【關(guān)鍵詞】地塞米松；胰島；細(xì)胞凋亡；疾病模型；動(dòng)物9 糖皮質(zhì)激素是體內(nèi)重要的胰島素拮抗激素，可以減弱胰島素介導(dǎo)的糖代謝效應(yīng)，使胰島素敏感性降低，甚至發(fā)展為糖尿病。這是一個(gè)涉及多組織、多水平的復(fù)雜過程，包括干擾胰島素靶器官如骨骼肌及脂肪組織的葡萄糖攝取和利用；調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞因子如脂聯(lián)素、抵抗素等的分泌，從而間接影響胰島素的敏感性；抑制胰島素分泌、觸發(fā)胰島細(xì)胞凋亡等環(huán)節(jié)。胰
3、島細(xì)胞凋亡是造成糖尿病的重要原因之一。佟春玲等研究發(fā)現(xiàn)，地塞米松處理老鼠3周后胰島細(xì)胞數(shù)量減少，功能下降[1]；苗明三等也發(fā)現(xiàn)地塞米松可造成小鼠糖耐量減低模型[2]。本研究旨在探討地塞米松是否通過引起胰島細(xì)胞增殖及凋亡從而促進(jìn)類固醇性糖尿病的發(fā)生。 1材料和方法 1.1主要試劑與設(shè)備MIN6小鼠胰島β細(xì)胞株是肉瘤病毒40通過T細(xì)胞轉(zhuǎn)染非肥胖糖尿病小鼠（NOD鼠）得到的胰島細(xì)胞瘤株，由上海瑞金醫(yī)院內(nèi)分泌腫瘤重點(diǎn)試驗(yàn)室惠贈(zèng)。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25％胰酶（美國GIBCO公司）?；A(chǔ)培養(yǎng)基含：高糖DMEM、NaHCO3（2.2
4、g/L）、青霉素G（0.1IU/L）、鏈霉素（0.1IU/L）和HEPES（2.0g/L）。地塞米松（美國SIGMA公司）；hochest33342、PI（杭州碧云天生物技術(shù)研究所）。 1.2方法 1.2.1MIN6細(xì)胞培養(yǎng)與地塞米松處理26～30代MIN6胰島β細(xì)胞于含15%FBS的DMEM培養(yǎng)液中，在37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，80%融合時(shí)消化，以每孔密度5×105mL-1細(xì)胞接種于6孔板，培養(yǎng)189h后進(jìn)行藥物干預(yù)。干預(yù)分組為：（1）對照組：僅加DMEM培養(yǎng)基；（2）實(shí)驗(yàn)組分5組，分別加入不同濃度
5、（50，100，200，400，800nmol/L）的地塞米松?！ ?.2.2MTT試驗(yàn)在96孔培養(yǎng)板中每孔接種100μL共5×104個(gè)細(xì)胞，不同濃度的地塞米松作用1，2，3，4d后，每孔加入5mg/mLMTT溶液10μL，37℃孵育4h后小心吸出上清液，每孔加入100μLDMSO振蕩10min，490nm波長測定各孔D值，計(jì)算細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次?！ ?.2.3Hochest/PI雙染色熒光顯微鏡觀測細(xì)胞凋亡在6孔培養(yǎng)板中，每孔接種5×105個(gè)細(xì)胞，不同濃度的地塞米松作用48h后棄上清，小心用PBS沖洗一遍，每孔加入1mLPBS
6、，分別加入1mg/mLHochest5μL和0.1mg/mLPI50μL避光反應(yīng)10min，置于熒光顯微鏡下，在波長為365nm的紫外光下觀察細(xì)胞的凋亡情況。記數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞的凋亡率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次?！ ?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS11.5軟件。多組間比較用單因素方差分析?！ ?結(jié)果 2.1地塞米松對MIN6細(xì)胞存活的影響9不同濃度的地塞米松作用不同時(shí)間后，隨地塞米松作用劑量和時(shí)間的增加，MIN6細(xì)胞存活率下降，提示地塞米松可以抑制MIN6細(xì)胞的生長（圖1）。 2.2地塞米松對MIN6細(xì)胞凋亡率的影響H
7、ochest/PI雙染色可以反應(yīng)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞內(nèi)被染成紅色的是死亡細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)有濃聚的藍(lán)色熒光而無紅色熒光的是凋亡細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)為均勻藍(lán)色熒光的是正常細(xì)胞。地塞米松作用48h后，隨著地塞米松濃度的增加，β細(xì)胞的凋亡逐漸增加，而800nmol/L濃度的地塞米松使細(xì)胞由凋亡轉(zhuǎn)向壞死（圖2～3）?！ ∨c對照組比較，☆<0.05,☆☆P<0.01. 圖1不同濃度的地塞米松（50,100,200,400,800nmol/L）作用24～96h后胰島細(xì)胞的存活率（略） Fig1CellviabilityofMIN6cellsafter
8、exposureofdexamethasone（50,100,200,400,800nmol/L）for24～96h 與對照組比較，☆☆:P<0.01. 圖2不同濃度的地塞米松（50,100,200,400,8
