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1、土壤中拮抗放線菌的篩選與鑒定一、培養(yǎng)基1放線菌培養(yǎng)基高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，NaCl0.5g，MgSO4.7H2O0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O0.01g，H2O1000mL，pH7.2～7.4。黃豆粉固體培養(yǎng)基：大豆粉20g（沸水煮30min，過濾保留濾液），蔗糖10g，可溶性淀粉5g，蛋白胨2g，酵母膏2g，NaCl2g，CaCO31g，MgSO4·7H2O0.5g，KH2PO40.5g，瓊脂15g，H2O1000mL，初始pH7.0。放線菌發(fā)酵培養(yǎng)基：大豆粉20g（沸水煮3
2、0min，紗布過濾后保留濾液），蔗糖10g，可溶性淀粉5g，蛋白胨2g，酵母膏2g，NaCl2g，CaCO31g，MgSO4·7H2O0.5g，KH2PO40.5g，H2O1000mL，初始pH7.0。2放線菌形態(tài)及培養(yǎng)特征研究用培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基（ISP1）：蔗糖30g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO4.7H2O0.5g，KCl0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O0.01g，H2O1000mL，pH7.2～7.4。麥芽膏－酵母膏培養(yǎng)基(ISP2)：酵母膏4.0g，葡萄糖4.0g，麥芽膏10.0g，微量鹽溶液1mL，
3、H2O1000mL，瓊脂20g，pH7.0～7.4。燕麥片培養(yǎng)基（ISP3）：燕麥片20g（加1000mL水煮20分鐘，然后用離心或過濾得澄清濾液并補(bǔ)足1000mL），微量鹽溶液1mL，pH7.2（微量鹽溶液：FeSO4.7H2O0.1g，MnCl2.4H2O0.1g，ZnSO4.7H2O0.1g，H2O100mL）。甘油-天門冬酰胺培養(yǎng)基（ISP5）：L-天門冬酰胺1.0g，甘油10.0g，K2HPO41g，微量鹽溶液1mL，瓊脂20g，pH7.0～7.4。無機(jī)鹽淀粉培養(yǎng)基：可溶性淀粉10g，K2HPO41.0g，MgSO4.
4、7H2O1.0g，CaCO32.0g，(NH4)2SO42.0g，微量鹽溶液1mL，H2O1000mL，pH7.4。馬鈴薯培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯塊200g（1000毫升水，80℃煮１小時(shí)，然后離心或過濾得上清液），葡萄糖20g，pH7.4。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10g，牛肉膏5.0g，H2O1000mL，pH7.4（亦可補(bǔ)加葡萄糖10g）。葡萄糖-天門冬酰胺培養(yǎng)基：葡萄糖10g，L-天門冬酰胺0.5g，K2HPO40.5g，牛肉膏2g，H2O1000mL，pH7.2。3測(cè)定生理生化特性供試培養(yǎng)基淀粉水解測(cè)定培養(yǎng)基：可溶性淀粉10g，
5、K2HPO45.65g，NaCl0.5g，KNO31g，MgCO31g，瓊脂15g，H2O1000mL，pH7.2~7.4。纖維素水解培養(yǎng)基：MgSO4.7H2O0.5g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，KNO31g，H2O1000mL。濾紙條（5cm×0.8cm）滅菌20分鐘。（pH7.0～7.2）明膠液化培養(yǎng)基：蛋白胨5g，葡萄糖20g，明膠200g，H2O1000mL，明膠滅菌10min，pH7.0（滅菌3次，每次20min，滅菌后立即浸入冷水中冷卻。）牛奶凝固與胨化培養(yǎng)基：脫脂牛奶1000mL，CaCO30.02
6、g，pH7.2~7.4，間歇滅菌三次（脫脂牛奶的制備：取新鮮牛奶，煮沸后冷卻，經(jīng)兩次離心（3000r/min，10min）脫脂，除去上層油脂，即得脫脂牛奶）。石蕊溶液配制：稱取2.5g石蕊浸泡在100ml蒸餾水中過夜，使石蕊充分溶解，然后過濾備用。石蕊牛奶的制備：2.5％的石蕊液與脫脂牛奶以4：100（V/V）比例混合，牛奶呈紫丁香色，分裝于試管中，滅菌備用。接種前抽檢滅菌是否徹底。硫化氫產(chǎn)生測(cè)試培養(yǎng)基（柴斯鈉培養(yǎng)基）：蛋白胨10g，檸檬酸鐵0.5g，K2HPO41g，瓊脂15g，H2O1000mL，pH7.2。黑色素產(chǎn)生培養(yǎng)基
7、：酪氨酸（L-Tyr）1g，酵母膏1g，NaCl8.5g，瓊脂20g，H2O1000mL，pH7.2。硝酸鹽還原試驗(yàn)培養(yǎng)基：MgSO4.7H2O0.5g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，KNO31g，NaCl0.5g，H2O1000mL，A溶液：對(duì)氨基苯磺酸0.5g，醋酸（80％醋酸，加2倍水稀釋）150mL；B溶液：二苯胺0.1g，H2O20mL)二苯胺試劑（二苯胺0.5g溶于100mL濃硫酸中，用20mL蒸餾水稀釋）碳源利用培養(yǎng)基：（NH4）2SO42.64g，KH2PO40.5g，K2HPO40.5g，MgS04.
8、7H2O0.5g，CuSO4.5H2O0.0064g，F(xiàn)eSO4.7H2O0.0011g，MnC12.4H2O0.0079g，ZnsO4.7H2O0.00l5g，瓊脂粉15.0g，蒸餾水1000mL。二、實(shí)驗(yàn)操作步驟1拮抗菌的形態(tài)鑒定1）菌株形態(tài)學(xué)特征觀察采用插
