土壤放線(xiàn)菌分離菌株的分類(lèi)鑒定與拮抗性篩選

土壤放線(xiàn)菌分離菌株的分類(lèi)鑒定與拮抗性篩選

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1、土壤放線(xiàn)菌分離菌株的分類(lèi)鑒定與拮抗性篩選韓秀芳2015年1月中圖分類(lèi)號(hào)UDC分類(lèi)號(hào)土壤放線(xiàn)菌分離菌株的分類(lèi)鑒定與拮抗性篩選作者姓名韓秀芳學(xué)院名稱(chēng)生命學(xué)院指導(dǎo)教師張建麗教授答辯委員會(huì)主席馮永君教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別理學(xué)碩士學(xué)科專(zhuān)業(yè)生物學(xué)學(xué)位授予單位北京理工大學(xué)論文答辯日期2015年1月TaxonomicidentificationandresistancescreeningofactinomycetesCandidateName:XiufangHanSchoolorDepartment:SchoolofLifeSci

2、enceFacultyMentor:Prof.JianliZhangChair,ThesisCommittee:Prof.YongjunFengDegreeApplied:MasterofScienceMajor:BiologyDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence:January,2015研究成果聲明本人鄭重聲明:所提交的學(xué)位論文是我本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作獲得的研究成果。盡我所知,文中除特別標(biāo)注和致謝的地方外,學(xué)位論文中不包含

3、其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果,也不包含為獲得北京理工大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)所使用過(guò)的材料。與我一同工作的合作者對(duì)此研究工作所做的任何貢獻(xiàn)均已在學(xué)位論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。特此申明。簽名:日期:北京理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文首先介紹了放線(xiàn)菌在生物分類(lèi)中的地位和多相分類(lèi)在放線(xiàn)菌分類(lèi)鑒定中的應(yīng)用,同時(shí)對(duì)向日葵菌核病的發(fā)生概況進(jìn)行了描述。采用玻璃珠搖床震蕩的方法對(duì)采自南極和內(nèi)蒙古的土壤進(jìn)行預(yù)處理,使用不同的選擇性培養(yǎng)基對(duì)土樣樣品中的微生物進(jìn)行分離篩選和結(jié)果分析。南極土樣樣品分離得到42株菌株,

4、芽孢桿菌的數(shù)量占43%,優(yōu)勢(shì)放線(xiàn)菌為節(jié)桿菌屬。其中編號(hào)E3T的菌株與其親緣關(guān)系最近種(ArthrobactercryoconitiCGMCC1.10698T)16SrDNA的序列相似性為98.54%,通過(guò)DNA-DNA分子雜交實(shí)驗(yàn),將其初步判斷為節(jié)桿菌屬的新種,然后對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)分類(lèi)。內(nèi)蒙古土樣樣品分離得到31株菌株,對(duì)所有分離菌株的16SrRNA基因序列進(jìn)行測(cè)定和分析,無(wú)疑似新種的發(fā)現(xiàn),鏈霉菌的數(shù)量占68%,稀有放線(xiàn)菌的數(shù)目相對(duì)較少。研究表明,菌株E3T好氧,革蘭氏陽(yáng)性,無(wú)運(yùn)動(dòng)性,與節(jié)桿菌屬中親緣關(guān)系最近的種

5、分別是ArthrobactercryoconitiCGMCC1.10698T(98.54%),ArthrobacterstackebrandtiiCCM2783T(98.33%)和ArthrobacteralpinusDSM22274T(98.05%),但DNA-DNA同源性分別為24.32%,23.52%和21.22%,均低于70%。主要甲基萘醌的組分是MK-9(H2)(55%)、MK-8(H2)(40%)和MK-10(H2)(5%),脂肪酸的主要成分是anteiso-C15:0(77.28%)、iso-C

6、16:0(7.40%)、anteiso-C17:0(4.46%)和iso-C14:0(3.07%)。其磷脂類(lèi)酸的類(lèi)型為PIM,PI,PG,DPG,GL和未知磷酸類(lèi)脂。綜合菌株E3T的形態(tài)特征、細(xì)胞化學(xué)分析、生理生化特性及分子分類(lèi)研究結(jié)果,確定其為節(jié)桿菌屬新種并指定為該種內(nèi)模式種,命名為南極節(jié)桿菌(Arthrobacternanjiensissp.nov.)。利用平板對(duì)峙試驗(yàn)的方法,測(cè)定分離自?xún)?nèi)蒙古向日葵試驗(yàn)田的31株放線(xiàn)菌對(duì)向日葵核盤(pán)菌(Sclerotiniasclerotiorum)的抑制作用,結(jié)果表明菌株

7、F5具有明顯的拮抗效果,抑菌帶寬度17.83mm,且轉(zhuǎn)代后拮抗活性穩(wěn)定。菌株F5及其發(fā)酵濾液對(duì)向日葵均有明顯的抑制作用,發(fā)酵濾液亦能抑制菌核的萌發(fā)。經(jīng)形態(tài)觀察及16SrDNA測(cè)序分析,將F5鑒定為鏈霉菌(Streptomycessp.)。關(guān)鍵詞:放線(xiàn)菌;節(jié)桿菌屬;多相分類(lèi);系統(tǒng)發(fā)育;核盤(pán)菌I北京理工大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractThispaperfirstlydescribedthestatusofactinomycetesclassificationandtheapplicationofpolyphasi

8、ctataxonomyinclassificationandidentificationofactinomycetes,theoverviewofsunflowersclerotiotiniadiseasewerealsostated.Bycombiningphysicaltreatmentsofvibrationwithdifferentselectivemedia,andtheseparatio

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