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《不同菌株固態(tài)生料混合發(fā)酵棉籽粕和菜粕》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、不同菌株固態(tài)生料混合發(fā)酵棉籽粕和菜粕（1）實驗材料基本原料：棉粕，菜粕，玉米培養(yǎng)基原料：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，酵母膏，葡萄糖，瓊脂，蒸餾水，酵母浸膏，K2HPO4，檸檬酸氫二銨，無水乙酸鈉，Tween80，MgSO4·7H2O，MnSO4·H2O使用儀器：分光光度計，振蕩器（振蕩頻率120^130次/min往復(fù))恒溫水浴，具塞三角燒瓶:100,250mL，容量瓶:25mL(棕色)，吸量管:1,3,10mL，移液管:10,50mL，漏斗:直徑50mm，表玻璃:直徑60mm。檢測試劑和藥品：異丙醇，正己烷，
2、冰醋酸，苯胺，鋅粉，3-氨基-1-丙醇，氯化鈀，羧甲基纖維na（2）菌株準備：（3）培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(培養(yǎng)芽孢桿菌):牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g(固體培養(yǎng)基加瓊脂18～20g)，蒸餾水1L，pH7.0～7.2，120℃滅菌30min。YPD培養(yǎng)基(培養(yǎng)酵母菌):酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g(固體培養(yǎng)基加瓊脂18～20g)，蒸餾水1L，120℃滅菌30min。MRS培養(yǎng)基(培養(yǎng)乳酸菌):蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，酵母浸膏5g，K2HPO42g，檸檬酸氫二銨2
3、g，無水乙酸鈉5g，Tween801mL，MgSO4·7H2O0.58g，MnSO4·H2O0.25g(固體培養(yǎng)基加瓊脂18～20g)，蒸餾水1L，pH6.2～6.8，120℃滅菌30min。PDA培養(yǎng)基(培養(yǎng)黑曲霉):將馬鈴薯去皮切成小塊，稱取200g置于鍋中，加水1L煮沸約30min，6～8層紗布濾成清液，濾液中加入葡萄糖20g(固體培養(yǎng)基加瓊脂18～20g)，補充水分至1L，加熱至融化，120℃滅菌30min。（4）發(fā)酵條件：原料棉籽粕粉碎過40目篩，將棉粕、菜粕，玉米粉按4∶4∶2比例混勻，料水比1
4、∶0.8，接種量5%，每組設(shè)兩個個重復(fù)置于500ml三角瓶中靜止培養(yǎng)24h，48h，72h后取出，于50℃下烘干，粉碎分析測定。（5）實驗結(jié)果和分析a測定硫代葡萄糖苷（下面）b測定棉酚含量（下面）c測定粗蛋白（按照教科書）d測定粗纖維（按照教科書）飼料中游離棉酚的測定方法2原理在3-氨基一1一丙醇存在下用異丙醉與正己烷的混合溶劑提取游離棉酚，用苯胺使棉酚轉(zhuǎn)化為苯胺棉酚，在最大吸收波長440nm處進行比色測定。3試劑和溶液除特殊規(guī)定外，本標準所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或相應(yīng)純度的水。3.1異丙醇C(CH3
5、)2CHOH,HG3-1167)3.2正己烷3.3冰乙酸（GB676）3.4苯胺(CsH,NH,GB691):如果測定的空白試驗吸收值超過0.022時，在苯胺中加入鋅粉進行蒸餾棄去開始和最后的10%蒸餾部分，放入棕色的玻璃瓶內(nèi)貯存在(0-4℃)冰箱中，該試劑可穩(wěn)定幾個月。3.53-氨基-1-丙醇(H2NCH,CH2CH2OH）。3.6異丙醇-正己烷混合溶劑:6:4(V/V)。3.7溶劑A:量取約500mL異丙醇、正己烷混合溶劑(3.6),2mL3-氨基一1一丙醇(3.5),8mL冰乙酸(3.3)和50mL水
6、于1000mL的容量瓶中，再用異丙醇一正己烷混合溶劑(3.6)定容至刻度。4儀器、設(shè)備4.1分光光度計:有10mm比色池，可在440nm處測量吸光度4.2振蕩器（振蕩頻率120^130次/min往復(fù))。4.3恒溫水浴4.4具塞三角燒瓶:100,250mL4.5容量瓶:25mL(棕色)4.6吸量管:1,3,10mL4.7移液管:10,50mL.4.8漏斗:直徑50mm.4.9表玻璃:直徑60mm5試樣制備采集具有代表性的棉籽餅樣品，至少2kg，四分法縮分至約250g，磨碎過2.8mm孔篩，混勻，裝人密閉容器，
7、防止試樣變質(zhì)，低溫保存?zhèn)溆谩?測定步驟6.1稱取1-2g試樣(精確到。.001g)>置于250ml具塞三角燒瓶(4-4)中，加入20粒玻璃珠，用移液管(4.7)準確加入50mL溶劑A(3.7)，塞緊瓶塞，放入振蕩器(4.2)內(nèi)振蕩1h(每分鐘120次左右)。用干燥的定量濾紙過濾，過濾時在漏斗(4.8)上加蓋一表玻璃(4.9)以減少溶劑揮發(fā)，棄去最初幾滴濾液，收集濾液于100mL具塞三角燒瓶(4.4)中。6.2用吸量管(4.6)吸取等量雙份濾液5-10mL(每份約含50^100yg的棉酚)分別至兩個25mL棕
8、色容量瓶(4-5)a和b中，如果需要，用溶劑A(3.7)補充至10mL。6.3用異丙醇一正己烷混合溶劑(3.6)稀釋瓶a至刻度，搖勻，該溶液用作試樣測定液的參比溶液。6.4用移液管(4.7)吸取2份10mL的溶劑A(3.7)分別至兩個25mL棕色容量瓶(4.5)a。和b。中。6.5用異丙醇一正己烷混合溶劑(3.6)補充瓶a。至刻度，搖勻，該溶液用作空白測定液的參比溶液。6.6加2.0mL苯胺(3.4)于容量瓶b和
