二乙酰一肟檢測(cè)尿素

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1、尿素的測(cè)定簡(jiǎn)介尿素又稱脲，是體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝的含氮終產(chǎn)物，不與血漿蛋白結(jié)合，分子量?jī)H為60，體內(nèi)生成量受蛋白質(zhì)攝入量，機(jī)體蛋白質(zhì)分解代謝及肝臟（生成尿素的唯一器官）功能的影響。尿素是表明游泳池水受到人體污染程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。二乙酰一肟（diacetylmonoxime）法檢測(cè)尿素（urea）含量原理：尿素與二乙酰在酸性環(huán)境中加熱可縮合成紅色的二嗪衍生物，顏色深淺與尿素含量成正比。因二乙酰不穩(wěn)定，故通常用二乙酰一肟代替，它與強(qiáng)酸作用，產(chǎn)生二乙酰。后者再與尿素反應(yīng)，縮合生成紅色的二嗪衍生物。臨床二乙酰一肟法

2、H+二乙酰一肟+水→二乙酰+羥胺H+二乙酰+尿素→二嗪化合物（粉紅色）泳池二乙酰一肟法臨床二乙酰一肟法測(cè)定尿素1原理尿素與二乙酰一肟在酸性條件下，經(jīng)鎘離子（或三價(jià)鐵離子）的催化產(chǎn)生縮合，并在氨基硫脲存在下，生成了4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，顏色深淺與尿素含量成正比。2試劑2．1酸性試劑：在1L容量瓶中加入蒸餾水約100mL，然后加入濃硫酸44mL及85%磷酸66mL，冷卻至室溫后加入硫氨脲80mg，硫酸鎘2g，溶解后用蒸餾水稀釋至1000mL，貯棕色瓶中放冰箱內(nèi)保存半年不變。2．22%二乙酰一肟溶液：

3、取2g二乙酰肟，溶于蒸餾水中，定容100mL混合均勻，即可使用。尿素使用液：取酸性試劑90mL加2%二乙酰一肟10mL，混合均勻即可。3方法3．1定性測(cè)定：取使用液2mL加入試管中，加0.1mL牛奶，在電爐上快速加熱至煮沸，保持沸騰1min，觀察顏色，用不含尿素樣品做比較。正常奶顏色為淡紅色，添加尿素的牛奶反應(yīng)顏色為玫紅色。3．2定量測(cè)定：取5mL使用液加入0.1mL牛奶，于20mL的螺口試管中，加蓋擰緊，于95℃水浴中反應(yīng)20min，過(guò)濾后，于525nm處測(cè)定吸光值。4結(jié)果由于正常牛奶中含有少量的尿素，所

4、以正常牛奶的反應(yīng)試管也是有顏色的，由于尿素含量較少，所以顏色為淡紅色。尿素含量異常的牛奶，反應(yīng)后顏色為玫紅色。兩者的區(qū)別明顯，在實(shí)際的質(zhì)量控制中，應(yīng)以正常奶做比較，來(lái)判斷原料奶中尿素含量的水平，進(jìn)而做出判斷。5小結(jié)優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，適用于自動(dòng)儀器分析。缺點(diǎn)：反應(yīng)不專一，線性范圍窄（<150mmol/L),特異性低，試劑腐蝕性強(qiáng)，加熱有異味釋放。難以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。游泳池水中二乙酰一肟的檢測(cè)方法常采用衛(wèi)生部頒發(fā)的二乙酰一肟分光光度法(簡(jiǎn)稱原法)。二乙酰一肟分光光度法（國(guó)標(biāo)法）1.原理尿素與二乙酰一肟及安替

5、比林反應(yīng)呈現(xiàn)黃色,在波長(zhǎng)460nm處有最大吸收峰,與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。2試劑2．1二乙酰一肟溶液(2g/L):取0．2g二乙酰一肟[CH3COC(NOH)CH3]溶于10%乙酸中,并稀釋至100ml,保存于棕色瓶中。2．2安替比林溶液(2g/L):取0．2g安替比林[C6H5NN(CH3)C(CH3)CHCO]溶于1+1硫酸中并稀釋至100ml,保存于棕色瓶中。2．3尿素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(100μg/ml)和尿素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(10μg/ml)。2．4儀器和器材UV-2102C型分光光度計(jì)、沸水浴鍋、25ml棕色

6、具塞比色管(粗細(xì)、玻璃厚薄均勻一致)。3分析步驟3．1吸取水樣10ml（尿素含量在0．001～0．015mg范圍內(nèi)）于25ml棕色具塞試管中，另取棕色具塞試管加入尿素標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0．1、0．3、0．5、0．7、0．9、1．1、1．3、1．5ml，并用純水稀釋至25ml。（注：顯色后溶液遇光退色，故需用標(biāo)色法）。3．2于上述各管加入1．0ml二乙?！咳芤?，混均。再加安替比林溶液2．0ml，混勻。3．3將上述試管在沸水浴中加熱50min。取出并在流動(dòng)的自來(lái)水中冷卻2min。立即以純水為對(duì)照，在460nm處，

7、用1cm比色皿，測(cè)定各管吸光值（加熱45～55min，呈最深色，若再延長(zhǎng)時(shí)間吸光值下降）。3．4以濃度對(duì)照吸光值，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以水樣吸光值從曲線上查出尿素含量。4小結(jié)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、靈敏度高。缺點(diǎn)：線性范圍窄、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)難以達(dá)到0.1999以上，對(duì)于尿素濃度高的水樣,雖可將水樣稀釋后進(jìn)行測(cè)定,但稀釋倍數(shù)難以估計(jì),所以需反復(fù)重測(cè),既費(fèi)時(shí),又浪費(fèi)試劑。二乙酰一肟分光光度法（改進(jìn)）1原理目前二乙酰一肟-安替比林分光光度計(jì)[1]是測(cè)定尿素的唯一標(biāo)準(zhǔn)方法,該法存在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍較窄(011~11

8、5mg/L),吸光度偏低,反應(yīng)產(chǎn)物不穩(wěn)定,溶液顯色后遇光褪色等多種問(wèn)題,對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大,為此本法參閱有關(guān)文獻(xiàn)[2,3],通過(guò)摸索,將國(guó)標(biāo)法中的標(biāo)準(zhǔn)曲線擴(kuò)大,定容體積由25ml改為10ml,使線性范圍變寬,吸光度的值增大,標(biāo)準(zhǔn)系列的穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng),結(jié)果滿意,其準(zhǔn)確度、精密度較好,能滿足基層實(shí)驗(yàn)室的需要。2試劑2．10．2％二乙酰一肟溶液：稱取0．2g二乙酰一肟［CH3COC：（NOH）CH3］溶于10％乙酸中，并稀