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1、生物材料論文：TGE-β_1緩釋微球殼聚糖支架對兔關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的研究【中文摘要】第1章不同脫乙酰度殼聚糖支架制備及降解性能評價制備不同脫乙酰度殼聚糖三維支架并考察其體內(nèi)、外降解性能,為殼聚糖作為軟骨缺損修復(fù)支架材提供前期實驗依據(jù)。方法：用脫乙酰度分別為65%、80%、95%殼聚糖,以相分離法制備三維支架,SEM觀察其表面形態(tài)、孔徑,以液體替代法檢測孔隙率,吸水溶脹率；含溶菌酶107U/L的PBS溶液(pH7.4)37℃氣浴振蕩,測不同時間(1d,3d,7d,14d,21d,28d)支架降解率,植入SD大鼠豎棘肌內(nèi)
2、,分別檢測2周、4周、6周、8周、10周、12周降解率及觀察其降解支架與組織局部情況。結(jié)果：不同脫乙酰度支架均具高孔隙三維結(jié)構(gòu),隨脫乙酰度增加孔隙率分別為93.6%、90.0%、85.1%,支架顏色由淡黃漸變白,溶脹率分別為820%、803%、772%,在體外溶菌酶的作用下逐步降解,至第28d時不同脫乙酰度支架分別降解為30.44%、22.88%、17.10%,且逐步降解第4周時降解率為57.48%,40.23%,29.53%。HE檢測示與周圍肌組織具有良好的相容性結(jié)論：支架具有良好的三維孔隙結(jié)構(gòu),能在體內(nèi)外逐步降解
3、,脫乙酰度越高降解越慢,相同時間點體內(nèi)降解速率快于體外降解,脫乙酰度為80%的殼聚糖降解速率與正常軟骨8周修復(fù)相一致。第2章緩釋TGF-β,殼聚糖微球的制備及性能檢測運用乳化交聯(lián)法制備殼聚糖微球,以包裹轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)并檢測其溶脹率、載藥量及緩釋等性能,評估利用殼聚糖微球作為控釋TGF-β1載體的可行性。方法：以液體石蠟為乳化劑,三聚磷酸鈉(TPP)為交聯(lián)劑,采用乳化交聯(lián)法制備殼聚糖微球。以包裹TGF-β1及牛血清白蛋白(BSA),分別制備TGF-β1殼聚糖微球與BSA殼聚糖微球。應(yīng)用掃描電鏡、激光
4、顆粒分布測量儀檢測微球形態(tài),檢測球溶脹率,ELISA夾心法測定微球載藥量、包封率及體外藥物緩釋率等綜合分析微球特性。結(jié)果：制備的微球粒徑分布集中,平均粒徑35μm,球形良好,球體均勻表面光滑,在酸環(huán)境下溶脹率最高,達800%；具有較高的包封效率88%,載藥量為11ng/mg,藥物釋放試驗表明TGF-β1及BSA均可以從微球中緩慢釋放,第7天累積釋藥量達90%,63.3%；在溶菌酶降解作用下逐步降解,6周時降解為57%。結(jié)論：乳化交聯(lián)法制備殼聚糖緩釋微球方法簡單易行,所得TGF-β1殼聚糖微球具有良好的緩釋性能,其作為
5、軟骨組織工程材料具有潛在的應(yīng)用價值。第3章負載可降解緩釋微球殼聚糖支架生物相容性實驗研究制備負載緩釋微球殼聚糖支架并對其生物相容性進行體內(nèi)外評價,為殼聚糖作為一類有前途的動物軟骨缺損修復(fù)支架材料提供實驗依據(jù)。方法：以乳化交聯(lián)法及相分離法制備負載緩釋微球多孔殼聚糖支架材料。以溶血試驗、急性毒性實驗、皮內(nèi)刺激實驗、熱源性實驗、肌內(nèi)植入實驗,整體評價自制負載緩釋微球殼聚糖支架的生物相容性。結(jié)果：材料孔徑多為200-350μm且相互貫通的三維立體多孔結(jié)構(gòu),各孔以板狀分開,孔隙率為93.63%±0.51%(n=6,x±s)；支
6、架溶血率為1.6%,鏡下未見明顯紅細胞破壞；材料急性毒性評價程度為無毒,材料浸提液組小鼠24h,48h,72h體重變化分別為0.3467±0.1075,0.4020±0.0796,0.4932±0.0838,各時間點與生理鹽水組組間配對t檢驗P>0.05；皮內(nèi)原發(fā)刺激記分及原發(fā)刺激指數(shù)(PII)均為0；熱源性實驗體溫升高度為0.17±0.06；肌內(nèi)植入實驗大鼠均成活,全身良好、無感染,4周左右新生毛正常分布,8周大體觀察支架周圍血管明顯增多,與周圍肌組織整合良好,心肝肺腎等內(nèi)臟均無特殊,1周、2周、4周、8周、12周
7、隨時間延長,淋巴細胞浸潤逐漸減少,可見血管及纖維長入支架,包裹逐漸變薄,支架漸降解。結(jié)論：負載微球多孔殼聚糖支架具有優(yōu)良的生物相容性,具有良好的三維孔隙結(jié)構(gòu)及可降解性,有望成為一種良好的軟骨修復(fù)材料。第4章制備負載TGF-β1微球殼聚糖支架并考察其對兔關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)研制負載緩釋TGF-β1微球殼聚糖支架,探討其體內(nèi)吸附自身髓腔中骨髓細胞及微環(huán)境中信號因子,誘導軟骨缺損處原位成軟骨細胞再生分化的效應(yīng)性。方法：乳化交聯(lián)法制備具有緩釋TGF-β1功能的殼聚糖微球,與液相分離法制得殼聚糖支架共混得復(fù)合支架,采用環(huán)境掃描電鏡
8、(SEM)觀察支架及微球形態(tài),激光顆粒分布測量儀檢測微球直徑分布,ELISA夾心法測微球TGF-β1包封率,載藥量以及緩釋率,體外檢測微球及支架4周降解率；選用兔作為實驗動物造成雙側(cè)股骨滑車部全層軟骨缺損,采用不同的材料構(gòu)成四組,觀察修復(fù)效果。于術(shù)后1月、3月取材,大體觀察軟骨修復(fù)狀況并予Masuoka評分,固定組織行甲苯胺藍染色,Ⅱ型膠原免疫
