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1、常用化學藥品檢驗方法 檢驗儀器的使用化學藥品檢驗室1內容：高效液相色譜儀器（高效液相）色譜理論滴定分析法2高效液相色譜儀一、結構示意圖.二、部件介紹一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成?，F在的儀器還一般配置有在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱等。制備型HPLC儀還配備有自動餾分收集裝置。3泵恒壓泵、恒流泵。恒流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔膜往復泵。目前應用的基本上是柱塞往復泵。（單元泵、四元泵、高壓二元泵）柱塞往復泵使用時的注意事項：1防止固體微粒進入泵體造成磨損。2流動相不應含有對泵體造成腐蝕的化學物質。3泵
2、空轉也會磨損柱塞，防止流動相跑空。4壓力過高會使密封環(huán)變形，產生漏液。5防止流動相中析出鹽晶，應開啟柱塞沖洗功能。4進樣器主要部件為定量環(huán)及六通閥。使用時應注意：1樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損2進樣量應不大于定量環(huán)體積的50%3每次分析結束后應沖洗進樣閥，現在大部分進樣器能自動實現此功能。部分自動進樣器還能實現柱前衍生化等操作。（Agilent）5色譜柱色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好、分析速度快等。使用色譜柱時應注意事項：1避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。2應逐漸改變溶劑的組
3、成，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?一般不能反沖，否則會迅速降低柱效。4使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。5流動相應先脫氣，避免氣泡進入柱體。6測試基質復雜的樣品時，應用保護柱。7定期用強溶劑沖洗色譜柱，清除駐留在柱內的雜質。8保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇后塞緊。6高效液相色譜的主要類型及其分離原理類型（按固定相分子聚集狀態(tài)和分離機制分）：分配色譜(液-液色譜)；吸附色譜(液-固色譜)；離子交換色譜；空間排阻色譜；親和色譜等。一、液-液色譜（一）反相鍵合相色譜化學鍵合相：利用化學反應將固定液的官能團鍵合在載體
4、表面特點：不易流失熱穩(wěn)定性好化學性能好載樣量大適于梯度洗脫71分離機制：分配+吸附疏溶劑理論流動相與溶質排斥力越強，作用時間↑，k↑，組分tR↑流動相與溶質排斥力越弱，作用時間↓，k↓，組分tR↓2．固定相：極性小的烷基鍵合相C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，簡稱ODS）3．流動相：極性大的甲醇-水或乙腈-水流動相極性>固定相極性（RP）底劑+有機調節(jié)劑（極性調節(jié)劑）例：水（緩沖鹽溶液）+甲醇，乙腈，THF84．流動相極性與k的關系：流動相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑5．出柱順序：極性大的組分先出柱極性小的組分后出柱
5、6．適用：非極性~中等極性組分（二）正相鍵合相色譜1．分離機制：溶質分子與固定相之間定向作用力、誘導力、或氫鍵作用力（有分配和吸附兩種說法）2．固定相：極性大的氰基、氨基、二氨基、芳硝基等鍵合相3．流動相：極性?。ㄍ琇SC）底劑+有機極性調節(jié)劑例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇94．流動相極性與k的關系：流動相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓5．出柱順序：結構相近組分，極性小的組分先出柱極性大的組分后出柱6．適用：氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小），分離物質也相似氨基鍵合相與硅膠性質差別大，堿性，分析極性大物質、酚、羧酸、核苷酸、糖類
6、、氨基酸等（也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分離甾酮、還原糖）10二.液-固色譜法（或液-固吸附色譜法）1.特點：流動相為液體，固定相為吸附相。2.分離機制：Xm+nSa=Xa+nSmK=[Xa][Sm]n/[Xm][Sa]n3.結論：顯然，分配系數大的組分，吸附劑對它的吸附力強，保留值就大。4.作用：a.適用分離相對分子質量中等油性試樣。b.對具有不同官能團的化合物和異構體有較高的選擇性。缺點：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現象。11三.離子交換色譜法1.分離機制；離子與離子之間的電荷吸引力2.適用范圍；凡能在溶劑中電離的物質一般均可用該法
7、進行分離。3.交換：KX=[-NR4+X-][Cl-]/[-NR4+Cl-][X-]DX=[-NR4+X-]/[X-]=KX[-NR4+Cl-]/[Cl-]4.結論：a.分配系數D愈大，表示溶質的離子與離子交換劑的相互作用愈強。b.親合力高的，在柱中保留值就愈大。5.應用：a.分離離子或可離解的化合物。b.主要用于分析有機酸、氨基酸、核酸、多肽等。12離子對色譜法1.特點：分離效能高，分析速度快，操作簡便.2.分離機制：又稱偶離子色譜法，是液－液色譜法的分支。它是根據被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大
8、，從而使其分離效果改善。3.分離過程：X+水相+Y－水相?X+Y－水相KXY=[X+Y－]有機相/[X+]水相·[Y－]水相DX=[X+
