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1、常用化學(xué)藥品檢驗(yàn)方法 檢驗(yàn)儀器的使用化學(xué)藥品檢驗(yàn)室內(nèi)容：高效液相色譜儀器（高效液相）色譜理論滴定分析法高效液相色譜儀一、結(jié)構(gòu)示意圖.二、部件介紹一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。現(xiàn)在的儀器還一般配置有在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱等。制備型HPLC儀還配備有自動(dòng)餾分收集裝置。泵恒壓泵、恒流泵。恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復(fù)泵和隔膜往復(fù)泵。目前應(yīng)用的基本上是柱塞往復(fù)泵。（單元泵、四元泵、高壓二元泵）柱塞往復(fù)泵使用時(shí)的注意事項(xiàng)：1防止固體微粒進(jìn)入泵體造成磨損。2流動(dòng)相不應(yīng)含有對泵體造成腐蝕的化學(xué)物質(zhì)。3泵
2、空轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞，防止流動(dòng)相跑空。4壓力過高會(huì)使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。5防止流動(dòng)相中析出鹽晶，應(yīng)開啟柱塞沖洗功能。進(jìn)樣器主要部件為定量環(huán)及六通閥。使用時(shí)應(yīng)注意：1樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損2進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%3每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥，現(xiàn)在大部分進(jìn)樣器能自動(dòng)實(shí)現(xiàn)此功能。部分自動(dòng)進(jìn)樣器還能實(shí)現(xiàn)柱前衍生化等操作。（Agilent）色譜柱色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好、分析速度快等。使用色譜柱時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)：1避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。2應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑?/p>
3、組成，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?一般不能反沖，否則會(huì)迅速降低柱效。4使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。5流動(dòng)相應(yīng)先脫氣，避免氣泡進(jìn)入柱體。6測試基質(zhì)復(fù)雜的樣品時(shí)，應(yīng)用保護(hù)柱。7定期用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除駐留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。8保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇后塞緊。高效液相色譜的主要類型及其分離原理類型（按固定相分子聚集狀態(tài)和分離機(jī)制分）：分配色譜(液-液色譜)；吸附色譜(液-固色譜)；離子交換色譜；空間排阻色譜；親和色譜等。一、液-液色譜（一）反相鍵合相色譜化學(xué)鍵合相：利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合
4、在載體表面特點(diǎn)：不易流失熱穩(wěn)定性好化學(xué)性能好載樣量大適于梯度洗脫1分離機(jī)制：分配+吸附疏溶劑理論流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力越強(qiáng)，作用時(shí)間↑，k↑，組分tR↑流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力越弱，作用時(shí)間↓，k↓，組分tR↓2．固定相：極性小的烷基鍵合相C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，簡稱ODS）3．流動(dòng)相：極性大的甲醇-水或乙腈-水流動(dòng)相極性>固定相極性（RP）底劑+有機(jī)調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑）例：水（緩沖鹽溶液）+甲醇，乙腈，THF4．流動(dòng)相極性與k的關(guān)系：流動(dòng)相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑5．出柱順序：極性大的組分先出柱極性小的組
5、分后出柱6．適用：非極性~中等極性組分（二）正相鍵合相色譜1．分離機(jī)制：溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力（有分配和吸附兩種說法）2．固定相：極性大的氰基、氨基、二氨基、芳硝基等鍵合相3．流動(dòng)相：極性?。ㄍ琇SC）底劑+有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇4．流動(dòng)相極性與k的關(guān)系：流動(dòng)相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓5．出柱順序：結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱極性大的組分后出柱6．適用：氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小），分離物質(zhì)也相似氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、酚、羧酸、
6、核苷酸、糖類、氨基酸等（也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分離甾酮、還原糖）二.液-固色譜法（或液-固吸附色譜法）1.特點(diǎn)：流動(dòng)相為液體，固定相為吸附相。2.分離機(jī)制：Xm+nSa=Xa+nSmK=[Xa][Sm]n/[Xm][Sa]n3.結(jié)論：顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對它的吸附力強(qiáng)，保留值就大。4.作用：a.適用分離相對分子質(zhì)量中等油性試樣。b.對具有不同官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高的選擇性。缺點(diǎn)：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象。三.離子交換色譜法1.分離機(jī)制；離子與離子之間的電荷吸引力2.適用范圍；凡能在溶劑中電離的物質(zhì)一般
7、均可用該法進(jìn)行分離。3.交換：KX=[-NR4+X-][Cl-]/[-NR4+Cl-][X-]DX=[-NR4+X-]/[X-]=KX[-NR4+Cl-]/[Cl-]4.結(jié)論：a.分配系數(shù)D愈大，表示溶質(zhì)的離子與離子交換劑的相互作用愈強(qiáng)。b.親合力高的，在柱中保留值就愈大。5.應(yīng)用：a.分離離子或可離解的化合物。b.主要用于分析有機(jī)酸、氨基酸、核酸、多肽等。離子對色譜法1.特點(diǎn)：分離效能高，分析速度快，操作簡便.2.分離機(jī)制：又稱偶離子色譜法，是液－液色譜法的分支。它是根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相
8、中溶解度增大，從而使其分離效果改善。3.分離過程：X+水相+Y－水相?X+Y－水相KXY=[X+Y－]有機(jī)相/[X+]水相·[Y－]水相DX=[X+Y－]有機(jī)相/X+水相=KXY
