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1、實驗常用試劑、緩沖液的配制方法361、1MTris-HCl組份濃度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。3.按下表量加入濃鹽酸調節(jié)所需要的pH值。pH值?????????????????????濃HCl?7.4???????????????????????約70mL7.6???????????????????????約60mL8.0????????????????????????約42mL4.將溶
2、解定容至1L。?5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。?2、1.5MTris-HCl組份濃度1.5MTris-HCl（pH8.8）配制量1L配置方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。3.用濃鹽酸調pH值至8.8。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。?注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度
3、的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個單位。?3、10×TEBuffer組份濃度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。3.將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。4.室溫保存。4、3M醋酸鈉組份濃度3M醋酸鈉（pH5.2）配制量100mL配置方法1.稱取
4、40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水攪拌溶解。2.加入冰乙酸調節(jié)pH值至5.2。3.加入去離子水將溶液定容至100mL。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBuffer組份濃度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl???????????????????8gKCl?????????????????????0.2g36Na2HPO4??????????1.42gKH2
5、PO4????????????0.27g2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。3.滴加HCl將pH值調節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。?4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS組份濃度10M醋酸銨配制量100mL配置方法1.稱量77.1g醋酸銨置于100～200mL燒杯中，加入約30mL的去離子水攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至100mL。3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris-HCl平衡苯酚□配置
6、方法1.使用原料：大多數市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應避免使用。同時也應避免使用結晶苯酚，結晶苯酚必須在160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產物，這些氧化產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致RNA和DNA的交聯等。因此，苯酚的質量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質量的苯酚進行分子生物學實驗。??2.操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗，并用肥皂和
7、水洗滌，忌用乙醇。?3.苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：?①液化苯酚應貯存于-20℃，此時的苯酚呈現結晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。?②加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。③加入等體積的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器
8、攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。④重復操作步驟③。?⑤加入等體積的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。⑥重復操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。?⑦使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。?⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇?配置方法1.說明：從核酸樣
