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1、實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法361、1MTris-HCl組份濃度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值?????????????????????濃HCl?7.4???????????????????????約70mL7.6???????????????????????約60mL8.0????????????????????????約42mL4.將溶解定容至1L。?5.高溫高壓滅菌后，室
2、溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。?2、1.5MTris-HCl組份濃度1.5MTris-HCl（pH8.8）配制量1L配置方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。?注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。?3、1
3、0×TEBuffer組份濃度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。3.將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。4.室溫保存。4、3M醋酸鈉組份濃度3M醋酸鈉（pH5.2）配制量100mL配置方法1.稱取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加入冰乙酸調(diào)節(jié)p
4、H值至5.2。3.加入去離子水將溶液定容至100mL。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBSBuffer組份濃度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl???????????????????8gKCl?????????????????????0.2g36Na2HPO4??????????1.42gKH2PO4????????????0.27g2.向燒杯中加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液
5、定容至1L。?4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS組份濃度10M醋酸銨配制量100mL配置方法1.稱量77.1g醋酸銨置于100～200mL燒杯中，加入約30mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至100mL。3.使用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris-HCl平衡苯酚□配置方法1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無(wú)色的，無(wú)需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除
6、去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。??2.操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過(guò)的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。?3.苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：?①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首
7、先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。?②加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。③加入等體積的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。④重復(fù)操作步驟③。?⑤加入等體積的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。⑥重復(fù)操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。?⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.
8、8。?⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇?配置方法1.說(shuō)明：從核酸樣
