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《薄層色譜板的制備和使用》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、實(shí)驗(yàn)一薄層色譜板的制備和使用目的要求:通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步理解薄層色譜技術(shù)理論,熟悉掌握薄層色譜板的制備和使用方法。一、薄層層析的基本原理把吸附劑(固定相)均勻地鋪在一塊玻璃板上,將待分離的樣品溶液點(diǎn)加在一薄層板的一端,在密閉的容器中用適當(dāng)?shù)娜軇鲃?dòng)相)展開,由于吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力大小不同及溶劑對(duì)不同物質(zhì)溶解分配系數(shù)不同,當(dāng)溶劑流過時(shí),各物質(zhì)在吸附劑和溶劑之間發(fā)生連續(xù)不斷地吸附,解吸附,再吸附,再解吸附。不易被吸附或易被溶劑溶解的物質(zhì)相對(duì)移動(dòng)得快一些。經(jīng)過一段時(shí)間的展開,不同的物質(zhì)被彼此分開,最后形成相互分離的斑點(diǎn)。將展開完畢的薄層板從密閉容器中取出后,應(yīng)用特定的試藥
2、或方法將斑點(diǎn)顯色,從而達(dá)到定性和定量的目的。二、薄層板的制備1.玻璃板用一塊玻璃板涂上很薄的吸附劑,如硅膠或氧化鋁等,玻璃板要求薄厚一致,大小相同,表面光滑平整,一般玻璃只要合乎這些要求就可。如果找不到平整均一的,將舊光學(xué)照像底片截成同樣大小也可以。用前先將玻璃用肥皂和水洗干凈,必要時(shí)浸泡在清洗液中,然后水洗烤干,用紗布擦光。玻璃板大小有各種規(guī)格,一般有20×20、20×10、20×5厘米,也有更小的,可根據(jù)需要自行設(shè)計(jì)。寬度要求至少能點(diǎn)開兩三個(gè)樣品,每兩點(diǎn)之間相隔至少1.5厘米,玻板長度一般要滿足展開10厘米的距離。點(diǎn)樣的起點(diǎn)應(yīng)距底邊至少1.5厘米的距離。2.吸附劑應(yīng)
3、用最廣泛的為硅膠和氧化鋁,市場上有專供薄層色譜用的吸附劑,規(guī)格分不含粘合劑的硅膠H,氧化鋁H和含有粘合劑熟石膏的硅膠G,氧化鋁G,如市售硅膠G含13%熟石膏,氧化鋁分中性、酸性、堿性三種。吸附劑的粒度范圍最好在180-200目之間,太小了流速慢,太大則影響分離效果。如不合要求,應(yīng)過篩。3.薄層板的涂布最簡單的涂布方法是用兩條比玻璃板厚0.25毫米47的玻璃條或有機(jī)玻璃條(或在同樣厚度的玻璃條下粘一層膠布),將玻璃板夾住,把調(diào)好的吸附劑漿液平鋪在薄層板上,然后用一有機(jī)玻璃條或直尺,迅速均勻地向前推進(jìn),就象推血片一樣,只要推進(jìn)的速度均勻一致,即可得到薄厚均勻的薄層板,如在一
4、塊玻璃板末端再接一塊相同的玻璃板,把剩余的裝液接過去,可使涂層邊緣整齊,厚度一致,吸附劑漿液的加水量和攪拌時(shí)間是涂布成敗的關(guān)鍵,像12×8平方厘米的玻璃板需要2~3克硅膠G,加4~6毫升水即可,只要技術(shù)熟練即能涂成厚薄一致,光滑平整的一塊薄層板。不同性質(zhì)不同批號(hào)的吸附劑,加水量和攪拌時(shí)間有時(shí)可有差異,應(yīng)根據(jù)情況摸出規(guī)律。為了達(dá)到涂布的各板厚度均勻一致,最好采用涂布器進(jìn)行薄層的涂布。為了增加薄層的牢固性及易于保存,可在涂布過程中加入某些粘合劑以增加薄層的硬度。一般采用添加劑羧甲基纖維素鈉(CMC—Na),應(yīng)用方法是取CMC-Na1克溶于100毫升水中,加熱煮沸溶解,按比例
5、與硅膠攪勻,鋪板。涂成之后先把玻板放在平面上,室內(nèi)干固,再對(duì)光檢查,看是不是均勻,有無氣泡,平整光潔度如何,合格的上烤箱110℃加熱30分鐘進(jìn)行活化,冷卻后貯于干燥器內(nèi)備用。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)盡量可能采用同批號(hào)涂布活化的薄層板,以減少因活化不一致引起的Rf值發(fā)生差異,目前國內(nèi)市場已有成品供應(yīng),如黃巖化學(xué)分析材料廠即有各種類型的薄層板出售。三、薄層板的使用1.點(diǎn)樣將樣品溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校☉?yīng)盡量避免有水),取微量注射器或玻璃毛細(xì)管截齊后,吸取一定量的檢樣,輕輕接觸到薄層上,使樣品自動(dòng)吸到薄層上,點(diǎn)的直徑不要超過0.3厘米,一次不能點(diǎn)完,待干后再點(diǎn),稍有過分就會(huì)損傷板面,影響展
6、開后的斑點(diǎn)形狀。每兩個(gè)樣點(diǎn)之間相距至少1.5厘米。點(diǎn)樣的起點(diǎn)距薄板底邊至少1.5厘米,以免樣點(diǎn)浸入展開溶劑中,同塊薄板上各樣點(diǎn)應(yīng)保持在與底邊平行的一條直線上,為控制好點(diǎn)樣距離,應(yīng)用薄層點(diǎn)樣尺架。2.展開根據(jù)薄層板大小,自行選用適當(dāng)玻璃標(biāo)本缸,長方形,如17×10×6厘米的標(biāo)本缸可容納下15×9厘米的玻璃板。采用較大的玻璃缸和玻璃板時(shí),在缸內(nèi)沿周圍缸壁襯一層預(yù)先浸有溶劑的濾紙,以便缸內(nèi)展開溶劑易達(dá)到飽和,防止邊緣效應(yīng)(即兩邊緣的點(diǎn)走得快)和同一物質(zhì)Rf值不一致現(xiàn)象。47一般將薄層板斜置展開容器內(nèi),密閉。先不使溶劑浸濕薄層板,飽和10~15分鐘后再進(jìn)行展開,展開溶劑沿著薄層
7、板向上移動(dòng)。對(duì)加粘合劑的涂板可以近于垂直的狀態(tài)進(jìn)行展開,而對(duì)未加粘合劑的薄層板則必須以傾斜狀態(tài)(15度角)進(jìn)行展開。為了防止產(chǎn)生“邊緣效應(yīng)”和展開溶劑不飽和現(xiàn)象。還可采用夾心式展開容器,其方法是將薄層板的左右兩側(cè)各刮去5~10毫米,墊上條狀玻璃或塑料,蓋一塊與薄層板同樣大小的玻璃,用夾子將兩邊夾好,插入展開溶劑中進(jìn)行展開,并能取得良好效果。3.顯色薄層展開后,涼干。如含粘合劑,即可直接噴顯色劑,使之顯色,有的還需經(jīng)紫外線(254nm)照射后方能顯色;對(duì)不含粘合劑的薄板,在噴顯色劑時(shí)應(yīng)盡量遠(yuǎn)離薄層板,否則會(huì)連吸附劑一起吹掉,應(yīng)予以注意。四、