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《大鼠灌服復(fù)方丹參方后血清中丹參素的測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大鼠灌服復(fù)方丹參方后血清中丹參素的測定潘桂湘［基金項目］：國家重點基礎(chǔ)研究規(guī)劃項目(G199944054403)作者簡介：潘桂湘(1976-)，男，碩士，研究方向為藥物分析。Tel：022-23051076Email：guixiangp@163.com，張伯禮，高秀梅（天津中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥研究中心，天津300193）[摘要]目的：了解大鼠ig復(fù)方丹參方后水溶性成分的吸收情況，建立大鼠血清中丹參素的含量測定方法。方法：采用液液萃取法對血清樣品進(jìn)行預(yù)處理，以對羥基苯甲酸為內(nèi)標(biāo)，甲醇-乙腈-0.5%醋酸（2.5：3.5：94）為流動相，用高效液相色譜法于281
2、nm檢測。結(jié)果：大鼠ig復(fù)方丹參方后在血清中檢測到丹參素，用所建立的方法繪制了其經(jīng)時血藥濃度曲線；而原兒茶醛則未在血清中發(fā)現(xiàn)，檢測到的是一個保留時間稍前于原兒茶醛的未知化合物。結(jié)論：大鼠灌服復(fù)方丹參方后，丹參素可經(jīng)胃腸道吸收入血，呈快吸收慢消除的過程。[關(guān)鍵詞]復(fù)方丹參方；丹參素；高效液相色譜法；體內(nèi)藥物分析復(fù)方丹參方由丹參、三七及冰片組成，具有活血化瘀，理氣止痛之功效，是臨床治療冠心病、胸悶、心絞痛的常用中藥處方。方中的化學(xué)成分根據(jù)其理化性質(zhì)和藥理作用的差異，可將之分為丹參水溶性成分、丹參脂溶性成分和三七皂苷類成分三大類。丹參水溶性成分含有多種酚酸類
3、化合物，該類成分具有很強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化、抗血栓等作用[1]，可能是復(fù)方丹參方中的主要活性部位。傳統(tǒng)中藥多為口服制劑，其有效物質(zhì)往往以血液為介質(zhì)而輸送到靶點產(chǎn)生作用。就此而言，給藥后的血清才是真正起作用的“粗的藥物”[2]。所以，中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)應(yīng)該在給藥后的血清組成中進(jìn)行探討[3]。雖然近年來國內(nèi)對復(fù)方丹參方的研究較多，但對該方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行深入探討的研究則相對很少。通過研究復(fù)方丹參方動物給藥后血清中的成分及其相應(yīng)的藥理作用，則可以更直接地了解到復(fù)方中真正起作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。所以本文對大鼠灌服復(fù)方丹參方后丹參水溶性成分的吸收狀況進(jìn)行了研究，并建立
4、了血清中丹參素的HPLC測定方法，為進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供科學(xué)的依據(jù)。1材料與方法1.1材料儀器HP1100高效液相色譜儀，G1311A-四元泵，G1322A-脫氣機(jī)，G1316A-柱溫箱，1314A-UV可變波長檢測器，HPRev.A.0501化學(xué)工作站。試藥甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，冰醋酸、乙酸乙酯為分析純，丹參素、原兒茶醛對照品（中國藥品生物制品檢定所），對羥基苯甲酸（化學(xué)純），三氯醋酸（分析純），復(fù)方丹參方藥液（取丹參和三七提取物適量，加蒸餾水配制成生藥量比為10：6的藥液）。動物SD大鼠，雌雄各半，體重(200±10)g，北京維通
5、利華實驗動物中心提供。1.2色譜條件HypersilC18（5μm）4.6mm×250mm色譜柱，甲醇-乙腈-0.5%醋酸（2.5：3.5：94）為流動相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長為281nm，色譜圖見圖1。1.3樣品的處理與測定精密量取血清樣品1.0mL，加入1%醋酸50μL，內(nèi)標(biāo)溶液50μL，10%三氯醋酸溶液200μL，用渦旋混合器混旋1min，12000r·min-1離心10min。將上清液轉(zhuǎn)移至具塞尖底離心試管中，用4mL乙酸乙酯旋渦混合提取1min，3000r·min-1離心2min，分取有機(jī)層，于45℃水浴上通N2流揮干。臨
6、用前殘渣用甲醇50μL溶解，超聲1min，旋渦混合1min，離心（12000r·min-1）10min，取上清液10μL進(jìn)樣，以內(nèi)標(biāo)工作曲線法[4]locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame3求算丹參
7、素的血藥濃度。1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制1.4.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制精密稱取4.0mg丹參素于10mL容量瓶中，用1%醋酸定容至刻度，然后取適量用1%醋酸稀釋成濃度為0.016，0.04，0.08，0.16，0.24，0.8mg·mL-1的丹參素標(biāo)準(zhǔn)溶液。另精密稱取4.1mg對羥基苯甲酸于10mL容量瓶中，用1%醋酸稀釋至刻度，再取1mL稀釋至10mL作為內(nèi)標(biāo)溶液。1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取空白血清樣品1.0mL，加入不同濃度的丹參素標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL，內(nèi)標(biāo)溶液對羥基苯甲酸50μL，10%三氯醋酸溶液200μL，按“1.3樣品的處理與測定”方法進(jìn)行處理與測定
8、。以丹參素與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)，丹參素濃度（X）為橫坐標(biāo)，用最小二乘法進(jìn)行線性回
