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《牛羊乳酪蛋白抗原表位鑒定及熱處理對其抗原性的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、論文分類號：〗學校代碼：１０７０８學號：１５０４０１７龜換蚤＃技ＡｆＳＨＡＡＮＸＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ碩士學位論文Ｔ＇ｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒｓＤｅｇｒｅｅ讓牛羊乳釀蛋白抗原表位鑒定及熱處理對其Ｊ了?。崳姟埃牎埃爜wＷＪ―一■Ｉ論文答辯日期：２０１８年５月ｍｉ學位授予單位：陜釀技大ＢＩＩＩＩｊ］＇申請工學碩士學位論文論文題目：牛羊乳酪蛋白抗原表位鑒定及熱處理對其抗原性的影響學科門類：工學一級學科：食品科學與工程培養(yǎng)單位：食品與生
2、物工程學院碩士生：韓波導師：宋宏新教授薛海燕副教授2018年5月IdentificationofbovineandgoatmilkcaseinantigenepitopesandeffectsofheattreatmentontheirantigenicityAThesis(orDissertation)SubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofEngineeringScien
3、ceByBoHanSupervisor：Prof.Hong-xinSongA.Prof.Hai-yanXueMay2018牛羊乳酪蛋白抗原表位鑒定及熱處理對其抗原性的影響摘要牛乳雖營養(yǎng)豐富，但也是引起人體過敏的八大類食物之一，蛋白質(zhì)是乳品中主要的過敏原。羊乳同樣具有較高的營養(yǎng)價值，有人認為羊乳的致敏性較牛乳低，但是，羊乳是否可代替牛乳，作為牛乳過敏者的乳源，學術領域說辭不一，值得探討研究。本研究從致敏機理出發(fā)，利用生物學軟件對牛羊乳主要過敏原酪蛋白進行抗原表位預測及免疫學驗證；利用Caco-2細胞模型探討抗原表位肽是否能以完整的形態(tài)被腸道上皮細胞吸收
4、，為后續(xù)研究合成抗原表位肽能否引起機體過敏反應提供參考。并通過不同條件的熱處理，探究牛羊乳酪蛋白抗原性和結構之間的變化規(guī)律，有目的的降低其致敏性，為低敏性和無致敏性牛羊乳的開發(fā)奠定一定的理論基礎。主要研究結果如下：（1）牛羊乳酪蛋白抗原表位預測及免疫學檢測驗證。利用SOPMA、theBepiPred1.0網(wǎng)絡服務器和DNASTAR三種生物信息學軟件成功預測出了牛乳αs1-CN可能抗原表位肽段是99~102148~149189~208；牛乳αs2-CN可能抗原表位肽段是72~75；羊乳αs1-CN可能抗原表位肽段是26~31140~142205~208
5、，羊乳αs2-CN可能抗原表位肽段是210~215。結果表明：較牛乳αs1-CN相比，羊乳雖含有少量的αs1-CN但它同樣具有較多區(qū)域的抗原表位，且二者存在一定的包含重疊關系。而牛羊乳αs2-CN均含有少量的抗原表位。選取差異較大的抗原表位肽段采用固相合成法合成，并挑選來源于牛乳α-酪蛋白的抗原表位肽P-1038（TDAPSFSDIPNPIGSENSEK），來源于羊乳α-酪蛋白的抗原表位肽P-1037（LSPEVP），與KLH連接制備成完全抗原，通過動物實驗驗證該抗原表位的免疫性。結果表明，以合成肽-KLH偶聯(lián)物作為抗原，(P-1037-KLH)-I
6、gG的效價和(P-1038-KLH)-IgG的效價均達到1∶204800，說明免疫原性很強；而以單純的合成抗原表位肽作為抗原，2種肽段對應血清的效價分別達到1∶12800和1∶6400，結果表明：合成抗原表位肽雖為小分子物質(zhì)，但實驗數(shù)據(jù)顯示具有一定的免疫性。通過交叉實驗檢測得出(P-1037-KLH)-IgG的特異性高于(P-1038-KLH)-IgG。（2）合成抗原表位肽在Caco-2細胞的轉(zhuǎn)運吸收研究。Caco-2單層細胞培養(yǎng)4-10d時為細胞生長對數(shù)期，可進行傳代培養(yǎng)；10d以后融合率達到I90%，細胞開始分化，堿性磷酸酶活性不斷增大，20d時
7、活性達到最大且此時的TEER值增至506Ω·cm2，熒光黃滲透系數(shù)P-8app值為5.0334×10，綜合以上指標，建模成功。采用旁路轉(zhuǎn)運的方式對合成抗原表位肽進行Caco-2跨膜轉(zhuǎn)運實驗，結果表明：來源于牛乳α-酪蛋白的抗原表位肽P-1038（TDAPSFSDIPNPIGSENSEK）、P-1039（EDVP）和P-1041（SSEE）的透過率為1%、14%和16%；來源于羊乳α-酪蛋白的抗原表位肽P-1037（LSPEVP）、P-1040（EGN）和P-1042（TQPKTN）的透過率為3%、32%和2%，透過率與片段大小有關。來自牛羊乳酪蛋白的
8、6條抗原表位肽段，在腸Caco-2細胞的轉(zhuǎn)運中存在部分水解。透過片段及水解后的小分子肽段是否具有致敏性引起機
