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《納洛酮對海馬神經(jīng)元的預(yù)防保護作用.doc》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、納洛酮對海馬神經(jīng)元的預(yù)防保護作用 【摘要】目的為觀察缺氧對大鼠海馬神經(jīng)元的影響及納絡(luò)酮的保護作用。方法采用細(xì)胞培養(yǎng)方法獲取10~14d的海馬神經(jīng)元,將含藥血清加入到培養(yǎng)液中,4h后建立95%N2+5%CO2混合氣體急性缺氧模型,胎盤蘭染色細(xì)胞計數(shù)并做流式細(xì)胞儀檢測以及酶法測定抗氧化酶(超氧化物歧化酶)的抗氧化能力及丙二醛、NO的含量。結(jié)果離體條件下納絡(luò)酮可顯著增強海馬神經(jīng)元的活性,降低其凋亡率及死亡率;提高細(xì)胞上清夜中超氧化物歧化酶的活性,降低丙二醛及NO的含量,且成量效比例關(guān)系。結(jié)論納絡(luò)酮在體外有抗缺氧損傷的作用。其
2、作用機制可能是通過抑制細(xì)胞凋亡,提高抗氧化酶的活力,清除自由基,而發(fā)揮作用。 【關(guān)鍵詞】納絡(luò)酮;缺氧;海馬神經(jīng)元;抗氧化劑 【Abstract】ObjectiveInordertoinvestigateandconfirmwhetherNalaxonehastheneuroprotectiveeffectinanoxicculturednatalhippocampalneuronalcells.MothodsThepresentstudyusedmorphologicalchangesandtheactivitie
3、sofSODandrhecontentsofMDAandNOasindicators.Themorphologicalchangeswasobservedbytrypanbluemethod,Theapoptosisrateanddeathrateofhippocampalneuronalwastestedbyusingflowcytometry(FCM).ThecontentsofMDAandNOandtheactivitiesofSODinthesupernatantsofcellsweredeterminedbybi
4、ochemicalmethods.ResultsTheresultsdemonstratedthat:invitro,comparingwiththecontrolgroup,Nalaxonesignificantlyincreasedtheactivitiesofhippocampalneuronalcells,decreasedtheapoptosisrateandthedeathrate,increasedtheactivitiesofSODanddecreasedthecontentsofMDAandNOinthe
5、supernatantsofcells.ConclusionTheaboveresultssuggestthat:theNalaxonehastheneuroprotectiveeffectonhippocampalneuronalcellsagainstanoxic.ThemechanismofthiseffectsofNalaxonemaybemediatedbyeliminatingthefreeradicals,byincreasingtheactivitiesofantioxidativeenzymestoinh
6、ibittheoxidativedamagescausedbyanoxic. 【Keywords】Nalaxone;Anoxic;Hippocampalneuronalcells;Antioxidants 4 腦缺血時機體產(chǎn)生大量的氧自由基,且NO在體內(nèi)局部濃度升高,與周圍的氧自由基等反應(yīng)而生成活性氮氧化合物,是一種強氧化劑,也可啟動脂質(zhì)過氧化。自由基醫(yī)學(xué)的研究表明,神經(jīng)元的損傷、凋亡、壞死等與脂質(zhì)過氧化密切相關(guān),而抗氧化劑可通過清除自由基,提高抗氧化酶等途徑有效的阻斷或防止這一過程[1]。近年發(fā)現(xiàn)納絡(luò)酮還具有非拮抗
7、阿片受體作用,對穩(wěn)定腦出血后神經(jīng)元有一定的作用,但目前還缺乏對海馬神經(jīng)元培養(yǎng)的相關(guān)實驗支持[2]。本試驗體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,建立急性氣體缺氧模型,胎盤蘭染色細(xì)胞計數(shù)并做流式細(xì)胞儀檢測以及酶法測定抗氧化酶(超氧化物歧化酶)的抗氧化能力及丙二醛、NO的含量。以此來探討納絡(luò)酮在體外是否有抗缺氧損傷的作用,其作用機制是否是通過抑制細(xì)胞凋亡,提高抗氧化酶的活力,清除自由基,而發(fā)揮作用的。從而來確定納絡(luò)酮在腦缺血中的神經(jīng)元保護作用,并尋求預(yù)防和治療腦缺血發(fā)生的藥物?! ?材料與方法 1.1材料 1.1.1實驗動物為新生的W
8、ister大鼠,由青島大學(xué)實驗中心提供?! ?.1.2試劑尼莫地平(德國拜耳公司),DMEM、馬血清(Gibco公司),胎牛血清(杭州西季青生物材料工程公司),超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)、一氧化氮(NO)(南京建成生物工程研究所),多聚賴氨酸(Sigma公司)。 1.1.3主要儀器設(shè)備