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1、芍藥甙對大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用【關(guān)鍵詞】芍藥甙；缺氧；海馬神經(jīng)元；抗氧化劑 Neuroprotectiveeffectofpaeoniflorinonanoxicallyculturedrathippocampalneurons 【Abstract】AIM:Toinvestigatepalneurons.METHODS:Hippocampalneuronslyinto4groupsaccordingtodifferentculturemediumsaddedol/Lnimodipine,40or80μmol/Lpaeoniflori
2、n,ornoanymedicine(ascontrolgroup).AcuteanoxiamodelL/LNO2+50mL/LCO2mixturegases.Theviablecellsethod.Theapoptosisrateanddeathrateofhippocampalneuronsetry(FCM).ThecontentsofMDAandNOandtheactivitiesofSODinthesupernatantsofcellcultureinedbybiochemicalmethods.RESULTS:Inparisonp
3、alneurons,palneuronsagainstanoxicinjury.Themechanismunderlyingthiseffectofpaeoniflorinmaybemediatedbyeliminatingthefreeradicals,byincreasingtheactivitiesofantioxidativeenzymestoinhibittheoxidativedamagescausedbyanoxia. 【Keypalneurons;antioxidants 【摘要】目的：觀察缺氧對大鼠海馬神經(jīng)元的影響及
4、芍藥甙的保護作用.方法：采用細胞培養(yǎng)方法獲取10~14d的海馬神經(jīng)元,將藥物加入到培養(yǎng)液中，4h后建立950mL/LNO2+50mL/LCO2混合氣體急性缺氧模型,臺盼藍染色細胞計數(shù)并做流式細胞儀檢測,以及酶法測定抗氧化酶（超氧化物岐化酶SOD）的抗氧化能力及丙二醛（MDA），NO的含量.結(jié)果：離體條件下芍藥甙組較對照組SOD活性升高,MDA及NO含量降低（P<0.01），且成量效比例關(guān)系,同時細胞凋亡率顯著降低.結(jié)論：芍藥甙在體外有抗缺氧損傷的作用,其作用機制可能是通過抑制細胞凋亡,提高抗氧化酶的活力,清除自由基而發(fā)揮作用. 【
5、關(guān)鍵詞】芍藥甙；缺氧；海馬神經(jīng)元；抗氧化劑 0引言 腦缺血時機體產(chǎn)生大量的氧自由基,且NO在體內(nèi)局部濃度升高,與周圍的氧自由基等反應(yīng)而生成活性氮氧化合物,是一種強氧化劑,也可啟動脂質(zhì)過氧化.自由基醫(yī)學的研究表明,神經(jīng)元的損傷、凋亡、壞死等與脂質(zhì)過氧化密切相關(guān),而抗氧化劑可通過清除自由基,提高抗氧化酶等途徑有效地阻斷或防止這一過程［1］.芍藥甙是芍藥的主要成分之一,能夠抑制花生四烯酸的代謝,具有抗血栓的作用,以及抗氧化和抗驚厥作用［2］.但對其在神經(jīng)細胞中的作用及機制研究甚少.本試驗通過體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,建立急性氣體缺氧模型,用臺盼藍
6、染色細胞計數(shù),流式細胞儀檢測以及酶法測定抗氧化酶（超氧化物岐化酶）的抗氧化能力及丙二醛(MAD),一氧化氮(NO)的含量,探討芍藥甙是否有抗缺氧損傷的作用,以尋求預(yù)防和治療腦缺血的藥物. 1材料和方法 1.1材料新生1~3dEM,馬血清(Gibco公司);胎牛血清(杭州四季青生物材料工程公司);超氧化物歧化酶(SOD),MAD,NO(南京建成生物工程研究所);多聚賴氨酸(Sigma公司).CO2細胞培養(yǎng)箱(上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司),垂直單向流型YJ超凈工作臺（蘇州市潔凈技術(shù)研究所）. 1.2方法 1.2.1海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)和分組
7、按已有的細胞培養(yǎng)方法［3］,取大鼠消毒,斷頭,分離出雙側(cè)海馬,剪碎成1cm3的組織塊,加入1.25g/L胰酶消化30min,用含有100mL/L胎牛血清及100mL/L馬血清的種植培養(yǎng)液終止胰酶的作用.制成細胞懸液（1×109/L）接種到6孔板中(2mL/孔),置于37℃50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,更換維持培養(yǎng)液（50mL/L胎牛血清,100mL/L馬血清）,以后每3d半量換液1次,第4~5日加入阿糖胞苷,終濃度為5mg/L(25μL/皿).接種10~14d的海馬神經(jīng)元隨機分為4組,即對照組,尼莫地平5μmoL/L組,芍藥甙40
8、μmoL/L組,芍藥甙80μmoL/L組.每組4個6孔板：將所用藥物加入到細胞培養(yǎng)液中進行孵育. 1.2.2尼氏染色鑒定神經(jīng)元將培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元經(jīng)0.02mol/LPBS(pH7.4)漂洗1
