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1、HPLC測定橘葉中橙皮苷的含量【摘要】目的：建立高效液相色譜法測定橘葉中橙皮苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為kromasilC18（4.6mm×250mm,5 μm）,流動相為甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60），檢測波長為283 nm。結(jié)果：橙皮苷檢測濃度在（0.05～0.5）mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9995），平均加樣回收率為96.6%，RSD=1.9%（n=5）。結(jié)論：本方法簡便、靈敏、準確，可用于橘葉的質(zhì)量控制。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法橘葉橙皮苷含量測定1實驗材料高效液相色譜儀為SSI-
2、seriesⅣpump泵SSIModel500-DETECTOR單元液相色譜儀；PC-3000系統(tǒng)檢測儀；TL-9000色譜工作站；超聲處理器（LC-350A）；甲醇為國產(chǎn)色譜純?nèi)軇?，天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心出產(chǎn)；乙酸為國產(chǎn)分析純試劑；水為實驗室專用純水機XYD-10-H處理超純水；橙皮苷對照品由中國生物制品檢驗所提供，批號：110721-200512；橘葉8批，由中藥材市場購買，均由山西省藥品檢驗所中藥室主任和建國鑒定。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為4.6mm×250mm，十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫為常溫，檢測波長為2
3、83nm，以甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60）為流動相，流速0.8μL/min。對照品及樣品的液相色譜圖見圖1。A.對照品B.樣品1.橙皮苷圖1對照品及樣品的HPLC圖2.2對照品溶液制備精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.4mg橙皮苷的溶液，搖勻，作為對照品溶液備用。2.3供試品溶液制備將收集的橘葉研成粗粉，精密稱定1g，置索氏提取器中，加石油醚（60℃～90℃）80mL，加熱回流3h，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80mL，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中，用少量甲醇分數(shù)次洗滌容器
4、，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇定容至刻度。32.4線性關(guān)系考察精密稱取橙皮苷對照品0.00054g、0.00103g、0.00204g、0.00416g、0.00509g分別置10mL容量瓶中加甲醇制成每1mL含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.5mg橙皮苷的溶液，各取10μL注入色譜儀中,按色譜條件測得峰面積積分值，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=204621152700X+2155993.329，r=0.9995，橙皮苷在（0.05～0.5）mg/mL呈良好的線性關(guān)系。2.5精密度
5、試驗精密吸取2.2中的對照品溶液（0.4mg/mL）10μL連續(xù)進樣6次，測橙皮苷峰面積，結(jié)果分別為88652906、86590036、85480256、87424068、87424661、87679805，RSD為0.9%。表明儀器進樣精密度良好。2.6穩(wěn)定性實驗取2.3供試樣品溶液分別在0h、2h、4h、8h、20h進樣10μL，測得橙皮苷的峰面積分別為25926741、26104361、26181248、26653055、25888751，RSD為2.3%。表明供試品溶液在室溫下20 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.7重現(xiàn)性實驗取亳州市場
6、購買的江蘇產(chǎn)地的橘葉，按2.3供試品溶液制備方法制備6份，分別進樣10 μL，測定RSD為1.7%。表明測定方法重現(xiàn)性良好。2.8加樣回歸試驗取已知含量的藥材5份，分別加入同樣含量的橙皮苷對照品，按供試品溶液制備方法和測定條件測定。結(jié)果見表1。2.9樣品測定取不同產(chǎn)地橘葉藥材，按2.3方法制備供試品溶液，測定橙皮苷含量，結(jié)果見表2。3含量測定限度根據(jù)表2橙皮苷含量測定結(jié)果，將橘葉藥材的橙皮苷含量限度定為本品按干燥品計算，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于1.25%。4討論3用HPLC測定橘葉中橙皮苷的含量，結(jié)果準確，精密度、重
7、現(xiàn)性良好，平均回收率96.6%，RSD為1.9%。在提取方法上，比較了超聲處理與加熱回流提取的效果，結(jié)果表明加熱回流提取比較完全，因此應(yīng)用加熱回流法。橙皮苷可以作為橘葉質(zhì)量控制的指標?！緟⒖嘉墨I】［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（下冊）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1975：2637.［2］肖培根.新編中藥志［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：349.3
