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1、HPLC測(cè)定橘葉中橙皮苷的含量【摘要】目的：建立高效液相色譜法測(cè)定橘葉中橙皮苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為kromasilC18（4.6mm×250mm,5 μm）,流動(dòng)相為甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60），檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm。結(jié)果：橙皮苷檢測(cè)濃度在（0.05～0.5）mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好（r=0.9995），平均加樣回收率為96.6%，RSD=1.9%（n=5）。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于橘葉的質(zhì)量控制。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法橘葉橙皮苷含量測(cè)定1實(shí)驗(yàn)材料高效液相色譜儀為SSI-ser
2、iesⅣpump泵SSIModel500-DETECTOR單元液相色譜儀；PC-3000系統(tǒng)檢測(cè)儀；TL-9000色譜工作站；超聲處理器（LC-350A）；甲醇為國(guó)產(chǎn)色譜純?nèi)軇?，天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心出產(chǎn)；乙酸為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?；水為?shí)驗(yàn)室專(zhuān)用純水機(jī)XYD-10-H處理超純水；橙皮苷對(duì)照品由中國(guó)生物制品檢驗(yàn)所提供，批號(hào)：110721-200512；橘葉8批，由中藥材市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)，均由山西省藥品檢驗(yàn)所中藥室主任和建國(guó)鑒定。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為4.6mm×250mm，十八烷基鍵合硅膠為填充劑，柱溫為常溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm，以
3、甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60）為流動(dòng)相，流速0.8μL/min。對(duì)照品及樣品的液相色譜圖見(jiàn)圖1。A.對(duì)照品B.樣品1.橙皮苷?qǐng)D1對(duì)照品及樣品的HPLC圖2.2對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.4mg橙皮苷的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液備用。2.3供試品溶液制備將收集的橘葉研成粗粉，精密稱(chēng)定1g，置索氏提取器中，加石油醚（60℃～90℃）80mL，加熱回流3h，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80mL，再加熱回流至提取液無(wú)色，放冷，濾過(guò)，濾液置100mL量瓶中，用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶
4、中，加甲醇定容至刻度。2.4線(xiàn)性關(guān)系考察精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品0.00054g、0.00103g、0.00204g、0.00416g、0.00509g分別置10mL容量瓶中加甲醇制成每1mL含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.5mg橙皮苷的溶液，各取10μL注入色譜儀中,按色譜條件測(cè)得峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為Y=204621152700X+2155993.329，r=0.9995，橙皮苷在（0.05～0.5）mg/mL呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。2.5精密度試驗(yàn)精密吸取2.2中的對(duì)照
5、品溶液（0.4mg/mL）10μL連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)橙皮苷峰面積，結(jié)果分別為88652906、86590036、85480256、87424068、87424661、87679805，RSD為0.9%。表明儀器進(jìn)樣精密度良好。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取2.3供試樣品溶液分別在0h、2h、4h、8h、20h進(jìn)樣10μL，測(cè)得橙皮苷的峰面積分別為25926741、26104361、26181248、26653055、25888751，RSD為2.3%。表明供試品溶液在室溫下20 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.7重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取亳州市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的江蘇產(chǎn)地的橘葉，按2.3供
6、試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定RSD為1.7%。表明測(cè)定方法重現(xiàn)性良好。2.8加樣回歸試驗(yàn)取已知含量的藥材5份，分別加入同樣含量的橙皮苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法和測(cè)定條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。2.9樣品測(cè)定取不同產(chǎn)地橘葉藥材，按2.3方法制備供試品溶液，測(cè)定橙皮苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2。3含量測(cè)定限度根據(jù)表2橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果，將橘葉藥材的橙皮苷含量限度定為本品按干燥品計(jì)算，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于1.25%。4討論用HPLC測(cè)定橘葉中橙皮苷的含量，結(jié)果準(zhǔn)確，精密度、重現(xiàn)性良好，平均回收率96.6%，RSD為
7、1.9%。在提取方法上，比較了超聲處理與加熱回流提取的效果，結(jié)果表明加熱回流提取比較完全，因此應(yīng)用加熱回流法。橙皮苷可以作為橘葉質(zhì)量控制的指標(biāo)。【參考
