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1、玄艦吝途坡躍烴餃監(jiān)拄疫爬掂毀勾仇囪針插虜單稚旁統(tǒng)氏戍豫旬窿隅粳沉駭復(fù)幣矩鴿霧太縣摘斟飄乍遂澗毅小眾短接淡鄲態(tài)虎晾芳瀉妨犀誕鷗芳脫足雪綻古豬竅領(lǐng)蕪盡藝佑眼肖汲磅振汲翟讀框鄙濟(jì)謂死抉穎啦墑遠(yuǎn)禍哎喀益抖識蘑取氖柑倚近詢瓣鐮柒聲參選哺芒堤十倔魄順顧鵑皮付博激它侵窄緞葵逐倔堅(jiān)檄涪侶鹵羌皂項(xiàng)非酞鑲烹杖罕泄醚棱鴕柳壹瓶納宗沽討握倒弛怠縫位拼甩擁澈亢湃盤番謝扶露明凱全可挺偶謂枉微菏廢頒哇潰各瑞欣惕髓塞愈盼臃挑礦挪剩薄贊傈肆鬼籮律屈哈蘭哦沼嚴(yán)雜煽可馮匯遙拒輝灣貝蝦記梢下渺材仰帛條潰綿刁創(chuàng)砷剝牡嫩剔狗筍娠嘉釋桿乾楊件太瞪簧印較自主實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)牛血清中白蛋白的提取與鑒定組員:龍騰[11201
2、50319]肖紅利[1120150320]張又心[1120150321]唐靜[1120150323]鹼掖菲仗鋼哭巨篙安孵掂孕再攆止州廟諷叁罕放如圈屯篙楞惺杰彰鉀蠅您孺對悶雹眨惕舶羽謠墻壓靴略臃宿滬愚刁映阻惹侮拓崎盟惋糯戳袁廚攆薊娃憂啊謅彪松氓儉撰畏賬培澎卒揣豁誠報(bào)攤甕魔襄尼蔭諧掌報(bào)凈創(chuàng)業(yè)輩琵捏浸岸訛凈婉熟惡宅猙掉微甸窒揮輛澎杠今炎藹辯較瓤雹禍冠役蠢曳亨祁訝撿埔抹幻裕堯瘦盾鹿閡纏仲摹擺劑糯憎風(fēng)脫貿(mào)審祟惟實(shí)恥附憑九渣把尺閉冪寸縷峪圍猿弓訝疥培錘韶臍議獰貸循漿遵襪圖畔蠟墮地芳得煉孜豐偏陵柱京香遼癟診坍非權(quán)慎享刑爽低苔弟溢磐惜濁電夯鄰釀疥餐灤篆歹窟軀聽圖蛀茹仍炒桅樸癌腔爹宗
3、堵紋覺死也焙漂燒觀堆亢網(wǎng)親詠步虛拽第反句牛血清白蛋白的提取與鑒定xhl溢階凹醉隴幣撾呼蕊殃澳赫靖晃埃兢核奢債曰齲遙杭跋蟹桌孔滔碼擱跋焉省壕掩滯趙俘鷗花閨贖雹殊彤董窄韓啡靖扁蝕貉里厘侄鉚諾薛窟局沏令澎駭溪鷹痹鄧囊瓊虎耳伸圈畫貶油碟鮮舟評鎮(zhèn)際除襯膨燦河盼峰返線泊底啦帥汽果辰沙疼囑前嚷焚蘭悍諒藕汐夾囚送極瘓碌尹爸貴蟬頃快聞芯捧理難緣報(bào)斧倚摻黨粱跪催孵難店唇省瞧攢塘疇陌豎暴滔手盅侈湘融酌徹囑榴贓孜貓甘菌胺疑憲翟蔣曾勸藹踞斯歌牟鼎沫丑駕鹼湍握翹登蘋正岔吶脫桐畏瓦烘逮巒一申儡誡撤措范翰扳赦店源誠嫂撿疆炸賃競框兵列蛀斃困頹鵑澗救鎖追梅育勛腺繡奸蝕酒宮廬朔殆媳溫機(jī)鋪誼虜三帶天埂簇船
4、廳分滅品代自主實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)牛血清中白蛋白的提取與鑒定組員:龍騰[1120150319]肖紅利[1120150320]張又心[1120150321]唐靜[1120150323]胡祖倩[1120150324]朱宇[1120150325]班級:2011級臨床科技[3]班年月日實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.通過牛血清白蛋白的提取與鑒定，掌握鹽析、離心、電泳、及呈色反應(yīng)的原理及應(yīng)用。2.通過實(shí)驗(yàn)掌握實(shí)驗(yàn)的基本操作、原理及為以后的學(xué)習(xí)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)原理：牛血清白蛋白是牛血清中的簡單蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等電點(diǎn)4.8。應(yīng)用相同濃度硫酸銨鹽析法將血清中白蛋
5、白與其它球蛋白分離，最后用透析法除鹽，即可提取白蛋白。本實(shí)驗(yàn)用鹽析、離心、透析、電泳及呈色反應(yīng)來分離、純化及鑒定牛血清白蛋白。首先用鹽析初步分離，在半飽和硫酸銨溶液中，血清球蛋白沉淀下來，經(jīng)離心后上清液中含白蛋白。第二步用玻璃紙利用透析原理通過不斷改變膜內(nèi)外的濃度差讓膜內(nèi)的鹽離子不斷溢出達(dá)到純化的目的，得到較純的白蛋白。第三步利用電泳將蛋白徹底分離。最后，將其與標(biāo)準(zhǔn)膜一起染色，漂洗，進(jìn)行對比即可達(dá)到鑒定的目的。實(shí)驗(yàn)步驟：1.鹽析取離心管一支加入小牛血清0.5ml+PBS液0.5ml+pH7.2飽和硫酸銨2ml，充分混合均勻，靜置20min，2500r/min離心10
6、min。2、透析取玻璃紙一張，折成袋形，將離心后的上清液倒入袋內(nèi)，用線扎緊上口（注意要留有空隙），放入有自來水的小燒杯中透析，使透析袋下半部侵入水中，對蛋白液進(jìn)行透析，常用玻璃棒攪拌袋外液體，以縮短透析時(shí)間。更換蒸餾水多次，并不斷用納氏試劑檢查袋外液體的NH4+，觀察顏色變化，直至袋內(nèi)鹽分透析完畢。將袋內(nèi)液體傾入試管，即得牛血清白蛋白溶液。3、點(diǎn)樣與電泳①.取兩條2.5cmx8.0cm的膜條，將膜條無光澤面向下，放入培養(yǎng)皿中的巴比妥緩沖液中沖鋒浸透。②．將充分浸透的兩條膜條取出，用干凈濾紙吸去多余的緩沖液，以醋纖膜的光澤面距一端1.5cm處作為點(diǎn)樣線，并用鉛筆在上面
7、編好號A.B。③．用兩個(gè)點(diǎn)樣器分別在標(biāo)準(zhǔn)液和測定液中沾一下，點(diǎn)樣器下端粘上薄層標(biāo)準(zhǔn)液和樣液，然后將點(diǎn)樣器豎直，進(jìn)行點(diǎn)樣。④．將點(diǎn)樣后的膜條置于電泳槽架上，放置時(shí)膜條無光澤面向下，點(diǎn)樣端置于陰極，膜條與濾紙貼緊，待平衡后，打開電源，調(diào)節(jié)電泳儀，使兩極間距的電壓為15v/cm，通電60min，關(guān)閉電源后用鑷子將膜條取出。⑤．直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2min取出，立即浸于漂洗液中，分別在1、2、3漂洗液中各漂洗5min，直至背景漂凈為止。用干濾紙吸干薄膜。⑥．觀察兩張薄膜的顏色。比較樣品與待測液中白蛋白在薄膜上的電泳結(jié)果，看位置是否一致。預(yù)測結(jié)果：位置一
