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1、國(guó)內(nèi)圖書分類號(hào)：Q71密級(jí)：公開國(guó)際圖書分類號(hào)：577西南交通大學(xué)研究生學(xué)位論文殼聚糖基可注射納米復(fù)合水凝膠的改良及生物學(xué)應(yīng)用學(xué)位類別：理學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)年級(jí)：2015級(jí)研究生：王亞男指導(dǎo)教師：吳堅(jiān)副教授趙安莎副教授二零一八年五月ClassifiedIndex:Q71U.D.C:577SouthwestJiaotongUniversityMasterDegreeThesisImprovementAndBiologicalApplicationOfChitosanBasedInjectableNano-compositeHydrog
2、elAcademicDegreeAppliedfor:MasterofScienceSpeciality:BiochemistryandMolecularBiologyGrade:2015Candidate:YananWangSupervisor:A.Prof.JianWuA.Prof.AnshaZhaoMay.2018西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第I頁摘要近年來，組織工程在組織和器官的缺損修復(fù)中表現(xiàn)出越來越大的潛力，基于三維支架材料的研究成為研究者們探尋的熱點(diǎn)。傳統(tǒng)的支架材料修復(fù)過程中會(huì)造成較大的創(chuàng)傷以及二次感染，可注射水凝膠應(yīng)運(yùn)而生，使解決這些
3、問題成為了可能。但這一類人工合成材料對(duì)于組織再修復(fù)中血管形成的影響及組織修復(fù)能力還缺乏深入的研究?；谝陨纤觯緦?shí)驗(yàn)將前期制備的殼聚糖基可注射納米復(fù)合水凝膠作為目標(biāo)材料，但細(xì)胞在凝膠中不能很好的粘附鋪展和增殖，RGD作為一種常用的刺激細(xì)胞粘附的肽序列能為細(xì)胞提供粘附位點(diǎn)，因此在凝膠中添加RGD對(duì)其進(jìn)行改良，得改良后的納米復(fù)合水凝膠，研究其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞（EC）和間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的生長(zhǎng)影響，同時(shí)利用動(dòng)物模型來研究納米復(fù)合水凝膠材料的血管化性能及對(duì)組織修復(fù)的促進(jìn)作用。在殼聚糖基納米復(fù)合水凝膠表面接種EC，研究了其對(duì)EC的增殖影響，細(xì)胞AO染色結(jié)果表明
4、細(xì)胞在凝膠中的形態(tài)為圓球形，未出現(xiàn)鋪展開，在納米復(fù)合凝膠中的cck-8結(jié)果顯示EC能夠繼續(xù)增殖；同時(shí)研究了EC在納米復(fù)合水凝膠中的遷移，結(jié)果顯示納米水凝膠能有效促進(jìn)EC的遷移。將殼聚糖基水凝膠加入不同濃度的RGD后研究細(xì)胞在水凝膠中的生長(zhǎng)狀況，AO染色結(jié)果表明細(xì)胞在RGD的濃度為2000ug/ml時(shí)出現(xiàn)鋪展，且cck-8結(jié)果表明添加RGD后與空白水凝膠相比能促進(jìn)細(xì)胞的增殖，因此將EC應(yīng)用的RGD濃度設(shè)定為2000ug/ml。將殼聚糖基納米水凝膠中加入濃度為2000ug/mlRGD后研究其對(duì)EC的生長(zhǎng)影響，結(jié)果顯示EC能在改良的納米復(fù)合水凝膠中大面積鋪
5、展且與平滑肌細(xì)胞（SMC）共同培養(yǎng)時(shí)有管狀結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。將MCS接種在加入不同濃度RGD改良后的殼聚糖基水凝膠中進(jìn)一步研究其對(duì)MSC生長(zhǎng)的影響，鬼筆環(huán)肽染色結(jié)果顯示RGD的量為1000ug/ml時(shí)MSC開始鋪展，cck-8結(jié)果顯示RGD能促進(jìn)MSC的增殖。將MSC接種在RGD濃度為1000ug/ml的改良?xì)ぞ厶腔{米復(fù)合水凝膠中，結(jié)果顯示MSC能在水凝膠中大面積鋪展生長(zhǎng)，且與SMC共培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)管狀結(jié)構(gòu)。成功的構(gòu)建了雞胚尿囊膜（CAM）模型，并做了HE染色，結(jié)果顯示改良?xì)ぞ厶腔{米復(fù)合水凝膠材料能促進(jìn)雞胚中細(xì)胞的遷移和組織中血管的生成。對(duì)大鼠皮下實(shí)驗(yàn)進(jìn)行C
6、D68、Ly6g和CollagenI免疫組化染色，結(jié)果顯示組織對(duì)水凝膠炎癥反應(yīng)較小且在改良納米復(fù)合水凝膠中開始有膠原化。進(jìn)一步建立了大鼠心肌梗死（MI）模型，西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第II頁超聲結(jié)果顯示改良納米復(fù)合水凝膠組大鼠心功能恢復(fù)較好；HE、Masson染色結(jié)果表明改良?xì)ぞ厶腔{米復(fù)合水凝膠能促進(jìn)MI修復(fù)；KI67結(jié)果表明心肌細(xì)胞在改良納米復(fù)合水凝膠組中有增殖活性。綜上所述，改良?xì)ぞ厶腔勺⑸浼{米復(fù)合水凝膠擁有良好的生物學(xué)性能，能促進(jìn)細(xì)胞的增殖及鋪展，且具有促進(jìn)血管生成和組織修復(fù)的性能，本實(shí)驗(yàn)為今后殼聚糖基納米復(fù)合水凝膠的廣泛應(yīng)用提供了充
7、分的理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：殼聚糖基納米復(fù)合水凝膠、生長(zhǎng)因子、血管化、組織修復(fù)西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第III頁AbstractInrecentyears,tissueengineeringhasshownmoreandmorepotentialintissueandorgandefectrepair,andtheresearchbasedonthree-dimensionalscaffoldshasbecomeahottopicforresearchers.Traditionalscaffoldmaterialscancauselargetraum
8、aandsecondaryinfectionintheprocessofrepair.Injectableh
