基于抗氧化活性的丹參藥材質(zhì)量評價

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1、基于抗氧化活性的丹參藥材質(zhì)量評價吳宏偉,楊洪軍中國中醫(yī)研究院中藥研究所,北京100700摘要:目的探討從藥效角度評價藥材質(zhì)量的方法.方法采用DPPH法對10個產(chǎn)地丹參藥材抗氧化能力進(jìn)行評價,評價結(jié)果與藥材中總丹酚酸類成分的含量進(jìn)行比較。結(jié)果不同產(chǎn)地的丹參具有不同的抗氧化能力,其能力的強(qiáng)弱與總丹酚的含量成正比.結(jié)論采用DPPtt法可以從抗氧化方面簡便、快捷的評價丹參藥材的質(zhì)量.關(guān)鍵詞:丹參;抗氧化;DPPH;質(zhì)量評價中藥的質(zhì)量控制目前主要以化學(xué)方法控制為主,通過一個或幾個成分的含量來評價藥材的質(zhì)量,然而一方面有

2、效成分難以確定,另一方面幾個有效成分的含量能否全面反應(yīng)藥材的質(zhì)量仍需進(jìn)一步研究,因此建立成分與活性之間的關(guān)系是中藥質(zhì)量評價的關(guān)鍵問題之一,甚至以簡單、可靠的藥效指標(biāo)直接評價藥材的質(zhì)量也是很好的研究方法。DPPHnl是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的自由基,為體外評價物質(zhì)抗氧化能力常用方法之一。若受試物能清除它,則提示受試物可能具有降低羥自由基、烷自由基或過氧自由基的有效濃度和打斷脂質(zhì)過氧化鏈反應(yīng)的作用。丹參為中藥活血化淤常用藥乜1,現(xiàn)代藥理研究表明其在心血管及抗氧化方面有活性。因此可以通過測定丹參藥材清除DPPII自

3、由基的能力從抗氧化的角度來評價丹參藥材的質(zhì)量。1實(shí)驗材料1.1樣品及試劑DPPH(1。卜二苯基一2咕肼基自由基),Sigma公司產(chǎn)品。10個產(chǎn)地的丹參藥材(由本中藥所李曼玲老師提供)。3971.2儀器Uv—T6新世紀(jì)紫外分光光度器,KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),Sartorius萬分之一電子天平;2實(shí)驗內(nèi)容2.1清除DPPII自由基的檢測方法州1分別精密吸取各待測液2ml,加入2mL的DPPH溶液(0.084mg/aL),搖勻后放置30min,以溶劑為空白對照,測定517nm處的

4、Abs值A(chǔ)1;同時測定上述待測液2mL與2mL空白溶劑混合后517nm的Abs值記為A2:再測定2mLDPPH溶液與2mL空白溶劑混合后517nm的Abs值記為A3:將三值根據(jù)下式計算對DPPH自由基的清除率。清除率(%)=[1一(A1一A2)/A3]×100%。2.2丹參提取液對DPPH自由基清除率的測定2.2.1線型范圍考察一取DPPH母液(0.084mg/mL),分別稀釋成下系列濃度0.0525、0.042、0.0336、0.0315、0.0252、0.021、0.0168,測定吸光度;以吸光度為X值,

5、濃度為Y值進(jìn)行線型回歸,回歸方程為:Y=23.443%-0.0009,R'--O.998。結(jié)果表明:DPPH含量在0.0525-0.0168mg/mL之間,濃度與吸光度成線性相關(guān)。2.2.2丹參提取溶劑的確定:精密稱定0.59丹參藥材(粉碎,過20目篩),分別加入95%、50%、30%篚J7,醇50mL,稱定,超聲30min,補(bǔ)重.再精密吸取lmL稀釋100倍后作為待測液按2.1項下進(jìn)行測定。(結(jié)果見表1)表l、不同濃度乙醇丹參提取液的對DP陰自由基的清除率(%)(x士sn=3)乙醇濃度30%50%95%河北

6、承德家種40.81±1.5243.13±0.8614.69±0.87-_—____—_——___—·—_____—_'_——__●_,_———!—!-!_!_I—-————’—_●●—=●●!●由表1可以看出30%、50%乙醇提取液清除DPPH自由基的能力明顯強(qiáng)于95%乙醇,故確定乙醇提取濃度為50%。2.2.3提取時間的考察精密稱定0.59丹參藥材(粉碎,過20目篩).分別加入50%的乙醇50mL,稱定,超聲15、30、45min,補(bǔ)重,再精密吸取lmL稀釋100倍后按2.1項測定。(結(jié)果見表2)表2、不同

7、提取時間丹參提取液對DPPH自由基清除率(%)(x士Sn_3)提取時間15min30min45min河北承德家種23.17±1.8942.32+2.1742.11±1.45由上表可以確定超聲提取30min丹參提取液對DPPH自由基的清除率達(dá)到最大。2.2.4反應(yīng)時間的考察哺1精密稱定0.59丹參藥材(粉碎,過20目篩),加入50%的乙醇50mL,稱定,超聲30min,補(bǔ)重.再精密吸取ImL稀釋100倍后按2.1項下進(jìn)行測定,但測定時間從反應(yīng)后立即測定。由圖2可以看出,隨著反應(yīng)時間的延長,吸光度逐漸緩慢減小,1

8、20min后反應(yīng)仍在進(jìn)行,說明丹參提取液清除DPPH自由基是一個緩慢的過程。本實(shí)驗把反應(yīng)時間定在加入DPPH溶液后半小時測定,以保證每個樣品的一致性。圖2丹參提取液與DPPH液反應(yīng)時間圖2.2.5不同產(chǎn)地丹參藥材的測定M取10個產(chǎn)地丹參藥材,粉碎過20目篩后,分別精密稱定O.59,加入50%的乙醇50mL,稱定,超聲30rain后補(bǔ)重.再分別稀釋20、50、100、200、400、800倍后,按2.

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