降解豆粕中抗原菌株的篩選及大豆肽制備的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)飼料檢測降解豆粕中抗原菌株的篩選及大豆肽制備的研究肖永友王倫涓姜玉朱麗如蔡發(fā)國廣州市博仕奧生化技術(shù)有限公司摘要通過對多種微生物降解豆粕中抗原和增加其小分子肽等能力的比較分析，篩選出效果較好的4種菌株，并研究它們混合培養(yǎng)對豆粕中抗原的降解作用。結(jié)果表明，在豆粕濃度為15％，接種量為5％(B一913：B一514：B一515：M一520為1：1：1：1)，培養(yǎng)溫度為35℃，210r／min，pH自然的條件下發(fā)酵60h，豆粕中的抗原接近0，小肽含量高達36．9％，活菌總合量達2×1010CFU／mL。。關(guān)鍵詞微生物豆粕大豆抗原小肽中圖分類號：$816．

2、3文獻標識碼：B文章編號：1002—2813(2008)10—0037—03豆粕是目前飼料工業(yè)和畜牧養(yǎng)殖業(yè)使用量很大的一種優(yōu)質(zhì)蛋白源。與棉粕、菜粕和花生粕相比，豆粕具有氨基酸平衡(賴氨酸含量高，接近理想氨基酸模式)、消化率高及適口性好等特點。與動物源蛋白(如魚粉、肉骨粉和血漿蛋白粉等)相比，豆粕具有貨源充足，不易被病原菌污染或氧化腐敗、含毒害物質(zhì)概率低及安全系數(shù)高等特點。但豆粕中也含有一些抗營養(yǎng)因子，如胰蛋白酶抑制因子和球蛋白等，這些抗營養(yǎng)因子對幼齡動物特別是斷奶仔豬的腸道結(jié)構(gòu)具有很大的破壞作用，并引起仔豬腹瀉等疾病。因此，為降低豆粕中的抗原等抗營養(yǎng)因

3、子及將其大分子蛋白降解成小分子肽，使動物能更好的吸收利用，相關(guān)人員做了大量研究工作，其中以酶解法效果較好，但成本相當高，并含有大量苦肽，后續(xù)工藝相當繁瑣。而利用微生物發(fā)酵處理，通過微生物作用對某些苦味肽基團進行修飾和重組，使小肽之間和小肽與氨基酸間發(fā)生移接及重排。制得的大豆蛋白活性肽具有溶解性好、無苦味和異味、口感好、溶解黏度小和受熱不凝固等優(yōu)點，不僅克服了酶解法產(chǎn)品苦味大和口感差等缺點，而且大大降低了生產(chǎn)成本。研究旨在篩選出高效降解豆粕中抗原等抗營養(yǎng)因子的菌株，并運用生物發(fā)酵技術(shù)探索大豆肽制備收稿日期：2008—05—21的新途徑，以期研發(fā)一種零抗原

4、，高生物活性肽含量的優(yōu)質(zhì)蛋白原料。1材料與方法1．1材料1)菌種真菌M一520，芽孢桿菌B一514，B一515，B一911，B一913，B一915，B一927，以上菌株均由這項試驗的實驗室保藏。2)原料豆粕。3)種子培養(yǎng)基真菌用PDA培養(yǎng)基，芽孢桿菌用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。4)發(fā)酵培養(yǎng)基15％的豆粕水溶液，pH自然。1．2方法1．2．1試驗方法保存菌種3五5*rc養(yǎng)黼基培乏湍翼薹培篙蠢竺發(fā)酵培i養(yǎng)基35℃．210r／rain48h篩選菌株j檢測簍袋瓣≥5囊囂≯發(fā)酵培養(yǎng)基麓囂囂高婦株圖I高效降解豆粕中抗原菌株的篩選及工藝條件優(yōu)化的流程I．2．2分析方法I)

5、抗原含量測定SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS—PAGE)。2)小肽含量測定三氯乙酸沉淀法。3)粗蛋白質(zhì)測定凱氏定氮法。飼料研究FEEDRI-：SF',LRCItNO，1o，2r耵837萬方數(shù)據(jù)廳飼料檢測4)菌含量血球計數(shù)板計算法。2結(jié)果與分析2．1高效降解豆粕中抗原及提高小肽的菌株的篩選2．1．1不同菌株對豆粕中抗原的影響將經(jīng)活化和擴大培養(yǎng)后的各種菌液按5％的接種量分別接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于35oC，210r／min條件下培養(yǎng)48h，然后取樣并檢測。2．1．2各菌株對豆粕中抗原的降解取發(fā)酵后的的豆粕，用0．03mol／L，pH8．0的T_ris—HC

6、I緩沖液浸提，并加入巰基乙醇(0．01mol／L)，50℃恒溫lh，離心分離(5000r／min，30IIlin)，取上清液(7S和1is)進行電泳分析(見圖1)。圖2經(jīng)不同菌株發(fā)酵后豆粕中蛋白的SDS—PAGE電泳注：1．發(fā)酵菌株為B一911，2．發(fā)酵菌株為B一515，3．發(fā)酵菌株為B一514，4．發(fā)酵菌株為B一913，5．發(fā)酵菌株為B一927，6．發(fā)酵菌株為B一915，7．發(fā)酵菌株為M一520，8．未發(fā)酵的豆粕，9．標準蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量豆粕中的抗原主要有7s和11S，其中7s大豆球蛋白又主要含有a’(Mw一72ku)、a(Mw一68ku)和8(M

7、w一52ku)3個亞基，lls大豆球蛋白則主要含有酸性亞基A1a(Mw一38ku)、A1b(Mw一38ku)、A2(Mw一38ku)、A3(Mw一45ku)、A4(Mw一38ku)、&(Mw一11ku)和堿性亞基B(Mw一19ku)等。由圖2可見，經(jīng)各種菌株發(fā)酵后的豆粕中7S和1lS的含量情況，其中7種不同株菌對7s降解都較徹底，這可能是由于7S的相對分子質(zhì)量較大，其含有的肽鏈形式較多，因此，各種株菌分泌的蛋白酶都能找到很好的切點，故這幾種株菌都能很好的降解7s。但也可看到，各種菌對11s的降解程度差異較大，其中B一9ll和B一927對11s的降解相對

8、稍差，但較未發(fā)酵豆粕中的llS大豆球蛋白都有相對的減少，而且其電泳條帶也呈連續(xù)狀態(tài)，說明其中1