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《枯草芽孢桿菌xf1菌株中xfsaca基因的克隆及功能驗證》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、第33卷第2期華南農(nóng)業(yè)大學學報VoL33．No．22012年4月JournalofSouthChinaAgriculturalUniversityApr．2012枯草芽孢桿菌XF1菌株中XFsacA基因的克隆及功能驗證賈凡H，毛自朝H，王志遠，趙靜，吳毅歆，何月秋，(1云南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學與生物技術學院，云南昆明650201：2云南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)生物多樣性應用技術國家工程中心，云南昆明650201)摘要：枯草芽孢桿菌BacillussubtilisXF1是從土壤中分離的一株利用蔗糖快、能高效防治根腫病的專
2、利菌株．為探明其高效的蔗糖代謝機制，用PCR從該菌中擴增到蔗糖代謝關鍵基因蔗糖一6一磷酸水解酶基因(XFsacA基因)，其編碼的蛋白質氨基酸序列與枯草芽孢桿菌B168菌株中的XFsacA基因有97％的相似性，且發(fā)生了l2個氨基酸突變．將該基因中約1．4kb的編碼框序列連接到表達載體pQE30上，構建了重組表達質粒pQE30一XFsacA，該質粒轉入到不能利用蔗糖的EscherichiacoliBI21中，后者能在以蔗糖為唯一碳源的M9無機離子培養(yǎng)基中正常生長，并表達出了一條約54000蛋白條帶．結果
3、預示XFsaeA基因氨基酸序列的替代可能是XF1高效利用蔗糖的基礎，同時XFsacA基因的克隆與其在E．coli中的表達研究，為利用蔗糖發(fā)酵的工程E．coli構建奠定了基礎．關鍵詞：枯草芽孢桿菌XF1；蔗糖；代謝；基因克隆中圖分類號：Q78文獻標志碼：A文章編號：1001—411X(2012)02—0154—05CloningandFunctionalConfirmationofXFsacAGenefromBacillussubtilisXF1JIAFan”MAOZi—chaoHWANGZhi—yu
4、an，ZHAOJing，WUYi．xin，HEYue—qiu，，，(1FacuhyofAgronomyandBiotechnology，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China；2NationalEngineeringCenterofAgriculturalBiodiversityforAppliedTechnology，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China)Abstract：Baci
5、llussubtilisXF1，whichispatentedandaveryeficientbiocontrolagenttocontrolclubrootdiseaseofcruciferouscrops，growsveryquicklywhensucroseisusedascarbonsource．Toelucidatethegrowthpromotionmechanismofsucrose，theXFsacAgene，encodingakeyenzymeforsucrosemetabo·li
6、sm，wasamplifiedbyPCRandsequenced．Itsaminoacidsequencehas97％homologtoBacillussubti—lisB168except12aminoacidsreplacement．ThecodingregionofthegenewasinsertedintoplasmidpQE30toconstructanexpressionplasmid，pQE30一XFsacA．AfterpQE30-XFsacAwastransformedintoEsc
7、herichiacoliBL21，whichcouldnotusesucrose，aproteinbandabout54000detectedbySDSPAGEanalysisindicatedthegenewassuccessfullyexpressedinBL21．ThefunctionofXFsacAgenewascon-firmedbythetransformedBL21havingtheabilitytogrowandsurviveinM9mediumwithsucroseassoleca
8、rbonsource．Thedataindicatedthatthereplacementof12aminoacidsofXFsacAinXF1strainmightireprovetheefficiencyinuseofsucrose，andcloningandfunctionalexpressionofXFsacAinE．colicouldbeagoodstrategyfordevelopingmetabolicengineeredE．colistraintous
