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《產(chǎn)膠原蛋白酶枯草芽孢桿菌的篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第29卷第4期大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報VoI．29No．42010年7月JournalofDalianPolytechnicUniversityJu1．2010文章編號：1674—1404(2010)04—0248—03產(chǎn)膠原蛋白酶枯草芽孢桿菌的篩選孫佳佳，王紅英，錢斯日古楞，常凱(大連工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院，遼寧大連ii6034)摘要：為了得到產(chǎn)膠原蛋白酶的微生物，以海產(chǎn)品市場附近采集的污泥為樣品，經(jīng)過富集培養(yǎng)后通過明膠培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，獲得1株產(chǎn)膠原蛋白酶的菌株。通過形態(tài)觀察和生理生化特征分析，以透明圈和菌落直徑之比(HC)為檢測指標(biāo)，初
2、步鑒定該菌株為芽孢桿菌屬。對它產(chǎn)生的膠原蛋白酶進(jìn)行分離和活力測定，得到的酶活力為44．982U／mL。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳檢測，該酶將分子質(zhì)量為100ku左右的膠原蛋白水解成為8ku左右的短肽，說明該酶能有效水解膠原蛋白。關(guān)鍵詞：芽孢桿菌；膠原蛋白酶；篩選中圖分類號：Q93文獻(xiàn)標(biāo)志碼：AScreeningofcollagenase。producingBacillusstrainSUNJia—jia，WANGHong-ying，QIANSi-ri—gu·leng，CHANGKai(SchoolofBiological&FoodEng
3、ineering，DalianPolytechnicUniversity，Dalian116034·China)Abstract：Microbesproducingcollagenasewereisolatedinglutinmediumfromenrichedcultivationofthemudoffishmarket．Basedonthehigherratioofhydrolyzelooptocolonydiameter(HC)，astrainwith44．982U／mLofcollagenaseactivitywasisolat
4、ed．ThestrainshouldbeBacillussubtilisbythewayofmorphologyandbiochemistrycharacteristics．Furtheranalysisshowedthatthecrudeenzymewithcollagenolyticactivitycouldhydrolyzed100kuofthenativecollageninto8kuofthesmallmoleculesubstance．Keywords：bacillus；collagenase；screenO引言蛋白酶的微生
5、物，并對其進(jìn)行初步鑒定。膠原蛋白酶(Collagenase，E．C3．4．24．3)是1材料與方法作用于膠原或其變性明膠而不作用其他蛋白質(zhì)的酶類。它來源廣泛，多種微生物以及動物的許多1．1材料組織細(xì)胞都可以產(chǎn)生膠原蛋白酶l_I]。目前已發(fā)現(xiàn)樣品，采自大連市海產(chǎn)品批發(fā)市場附近的污泥。溶組織梭菌、溶藻弧菌等微生物能產(chǎn)生膠原蛋白主要試劑：膠原蛋白粉末，本實驗室自制；酪酶，并不斷發(fā)現(xiàn)新的產(chǎn)膠原蛋白酶的微生物¨2]。蛋白，金鉑銥科技有限公司?？莶菅挎邨U菌生境多樣，可利用的營養(yǎng)物質(zhì)1．2產(chǎn)膠原蛋白酶菌的篩選種類十分豐富，這決定了其具有豐富的產(chǎn)酶系統(tǒng)
6、，l_2．1培養(yǎng)基具備生產(chǎn)多種酶的應(yīng)用潛力]。研究表明，枯草富集培養(yǎng)基(100mL)：膠原蛋白10g，酵母芽孢桿菌能夠產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、葡膏0．01g。聚糖酶、植酸酶、果膠酶和木聚糖酶等十幾種明膠培養(yǎng)基(100mL)：明膠2．0g，蛋白胨酶_4]。近年來，對枯草芽孢桿菌的研究已漸進(jìn)到0．5g，KH2PO40．05g，MgSO4·7HzO0．02g，遺傳學(xué)與微生物學(xué)領(lǐng)域_5]，但由枯草芽孢桿菌提NaC10．01g，pH7．2～7．5，瓊脂1．5g。取出膠原蛋白酶的文章還未見報道。本實驗以海1．2．2富集培養(yǎng)產(chǎn)品市場附近的污泥為
7、樣品，篩選新的高產(chǎn)膠原取污泥10g置于三角瓶中，加100mL富集收稿日期：2009—10—19．基金項目：遼寧省教育廳A類項目(2008063)．作者簡介：孫佳佳(1985一)，女，碩士研究生；通信作者：王紅英(1968一)，女，副教授第4期孫佳佳等：產(chǎn)膠原蛋白酶枯草芽孢桿菌的篩選249培養(yǎng)基。在32℃搖床培養(yǎng)48h后過濾，取濾液。10min后，立即加入3．0mI的10三氯醋酸溶1．2．3初篩液，搖勻靜置15min，過濾，收集的即是樣品的濾將濾液稀釋，分別在10～10～。下各取lmL液。另取一試管，先加入1．0mL酶液和3．0mL于明膠
8、培養(yǎng)基用稀釋涂布法在平皿上將菌液涂的1O三氯醋酸溶液，再加入2．0mL0．5的酪勻，28℃條件下培養(yǎng)48h，選擇生長良好、形態(tài)明蛋白溶液，混勻后于3O℃水浴保溫10min，過濾，顯并有透明圈菌落的平皿。收集
