中草藥栽培與鑒定專業(yè)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(一)

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1、東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院題目：中草藥多糖的分離提取和理化性質(zhì)研究姓名：***學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院學(xué)號(hào)：20110*****年級(jí)：2011級(jí)東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中草藥的分離提取和理化性質(zhì)研究生命科學(xué)學(xué)院2011級(jí)***201101****摘要：本實(shí)驗(yàn)采用熱水浸提和乙醇醇沉的方法提取刺五加多糖，得到的粗多糖回收率為1.21﹪，再對(duì)得到的粗多糖進(jìn)行定性、定量分析。用苯酚—硫酸法測(cè)定已提取出的粗多糖中單寡糖與多糖的含量為14.7%；經(jīng)過(guò)薄層層析分析單糖的組成，其中組成多糖的單糖多屬于葡萄糖、阿拉伯糖和甘露糖；用SepharsoseCL—6B柱層析法測(cè)定多糖的相對(duì)分子量約為3.47萬(wàn)道爾頓。高

2、效液相色譜分析單糖含的結(jié)果是刺五加多糖中的單糖種類有半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖等，其中含量較多的葡萄糖和甘露糖。關(guān)鍵詞：刺五加多糖分離提取理化性質(zhì)多糖是由單糖連接而成的多聚物，人們對(duì)多糖的研究已經(jīng)有很長(zhǎng)時(shí)間的歷史，對(duì)多糖的初始研究可追溯到1936年Shear對(duì)多糖抗腫瘤活性的發(fā)現(xiàn)，至20世紀(jì)50年代，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些真菌多糖和高等植物多糖具有明顯的抑瘤活性。最近又發(fā)現(xiàn)許多中藥多糖還具有降血糖作用。70年代以來(lái)，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)多糖及糖復(fù)合物在生物體內(nèi)不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料，重要的是它存在于一切細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)中，參與生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)。多糖類物質(zhì)是所有生命有機(jī)體的重要組成部分，廣泛

3、存在于動(dòng)物、植物和微生物細(xì)胞壁中，是生物體內(nèi)除核酸和蛋白質(zhì)以外的又一類重要的生物分子?？茖W(xué)研究已經(jīng)確認(rèn)糖類物質(zhì)具有許多生物活性，包括抗腫瘤、免疫、降血糖和抗病毒等，而且對(duì)機(jī)體幾乎無(wú)毒副作用。中藥多糖因具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤降血糖等藥理作用，而且?guī)缀鯖]有毒性與副作用，因此引起國(guó)內(nèi)外藥理學(xué)家、生物學(xué)家和化學(xué)家們的關(guān)注。多糖的提取應(yīng)根據(jù)多糖的來(lái)源和提取部位的不同確定所用提取方法。多糖的提取方法主要有水提法、酸提法、堿提法、超聲提取法和微波提取法等。本次試驗(yàn)的材料為刺五加，采用水提法提取刺五加多糖，利用苯酚一硫酸比色法間對(duì)多糖含量進(jìn)行測(cè)定，并依次利用薄層層析法、高效液相色譜法以及分子篩層

4、析對(duì)刺五加多糖的理化性質(zhì)進(jìn)行分析。1材料與方法8東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1.1實(shí)驗(yàn)材料刺五加1.2實(shí)驗(yàn)試劑濃硫酸、葡萄糖、6%苯酚、標(biāo)準(zhǔn)樣（木糖、半乳糖醛酸、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和阿拉伯糖）、三氟乙酸（TFA）、展開劑（正丁醇：乙酸：水=4：1：5）、顯色劑（苯胺—鄰苯二甲酸正丁醇飽和水溶液）、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、氫氧化鈉（NaOH）、濃鹽酸（HCl）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）、無(wú)水乙醇（CH3CH2OH）、無(wú)水甲醇（CH3OH）、氯仿（CH3Cl）、超純水、藍(lán)色葡聚糖，重鉻酸鉀及相對(duì)分子量為15

5、.3萬(wàn)，46.1萬(wàn)的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品、生理鹽水等。1.3實(shí)驗(yàn)儀器可見分光光度計(jì)、分析天平、離心機(jī)、SHIMADZULC-10AT（島津）液相色譜儀、SHIMADZULC（島津）色譜柱、層析缸、硅膠板（10×10cm）、毛細(xì)管、噴霧器、烘箱、水解小瓶、蒸發(fā)皿、吹風(fēng)機(jī)、層析柱1.5cm×100cm、恒流泵、自動(dòng)部分收集器、紫外檢測(cè)儀、記錄儀、可見光分光光度計(jì)、容量瓶、移液槍、試管等。1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1多糖的分離、提取與純化稱取曬干的刺五加約30g，用蒸餾水浸泡約24h后，在80℃下煮提1.5h，用紗布過(guò)濾取濾液至鐵鋼中，再加入少量水按以上方法分別煮提1h、0.5h，將3次得到的濾液在12

6、0℃下濃縮至50ml以下，轉(zhuǎn)移至兩成為250ml燒杯中，加入3倍體積95%乙醇中，封上封口膜保存。醇沉后倒出上清，將沉淀3000r/min離心15min，取出沉淀，沉淀依次用無(wú)水乙醇、乙醚脫水，P2O5真空干燥過(guò)夜，即得粗多糖。1.4.2多糖含量測(cè)定準(zhǔn)確稱取無(wú)水葡萄糖10mg，加少量蒸餾水溶解，后定容至于100mL，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)液0（0號(hào)管）、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mL于大試管中，補(bǔ)加蒸餾水至1.0mL。向每只試管中加入6%苯酚0.5mL，混勻，再加入濃硫酸2.5mL，立即振蕩，室溫放置10min，以0號(hào)管為參比，于4908東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院n

7、m測(cè)定光吸收值。以葡萄糖的微克數(shù)為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確稱取多糖樣品10mg，先用少量蒸餾水溶解，然后定容至100mL，得到多糖溶液。1號(hào)管中加入1.0mL蒸餾水，2、3、4號(hào)管中加入1.0mL多糖溶液。分別向每個(gè)試管中加入6%苯酚溶液0.5mL，振蕩混勻，濃硫酸2.5mL，立即振蕩。冷卻10min后，以1號(hào)管作為參比，于490nm測(cè)定2-4號(hào)管的光吸收值。所得三個(gè)數(shù)值取平均值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的多糖含量。1.4.3