白芍高效液相色譜指紋圖譜的研究

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1、白芍高效液相色譜指紋圖譜的研究【摘要】目的研究白芍的高效液相色譜指紋圖譜，為科學(xué)評(píng)價(jià)及有效控制其質(zhì)量提供可靠方法。方法利用HPLC方法，梯度洗脫，測(cè)定了21批白芍樣品。色譜條件為：HypersilC18柱，流速ml/min,柱溫25℃，流動(dòng)相A為乙腈；流動(dòng)相B為%磷酸水，流動(dòng)相A梯度洗脫(95%～65%乙腈)，分析時(shí)間為60min，時(shí)間為0，15，25，60min，A(%)為95%，86%，86%，65%。結(jié)果21批白芍樣品獲得包括芍藥苷；flow-rate：ml/min；columntemperature：25℃;mobilephase：aceto

2、nitrileandH2O(acidifiedto%withphosphoricacid)(B).TheconcentrationsofsolventAwere5%，86%，86%and5%at0，15，25,60min，respectively．ResultsTheHPLCchromatographicfingerprintofRadixPaeoniaeAlba，showing1characteristicpeaks，wasestablishedfrom1lotsofRadixPaeoniaeAlbaproducts．Theresultsofsim

3、ilarityanalysiswasthesameasthatofherarchicalclusterchromatographicfingerprintofRadixPaeoniaeAlbawithhighspecificitycanbeusedtocontrolitsqualityandassuretolotconsistency．Keywords：RadixPaeoniaeAlba；Paeontflorin；HPLC；Fingerprinting白芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall的干燥根。文獻(xiàn)［1］報(bào)道，其主要成分為

4、芍藥苷、芍藥內(nèi)脂苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷，通稱芍藥總苷。具有抗炎、抗病毒、解痙鎮(zhèn)痛、護(hù)肝等多種藥理活性［2～4］。色譜指紋圖譜方法是評(píng)價(jià)植物藥質(zhì)量的有效方法之一。本文應(yīng)用HPLC方法對(duì)白芍指紋圖譜進(jìn)行了研究,以期為全面控制白芍質(zhì)量提供可靠方法。　　1儀器與試藥儀器高效液相色譜儀(四元泵、柱溫箱、MVD和DAD檢測(cè)器，Agilent1100色譜工作站)、電子分析天平AE240、CQ250超聲波清洗器；UV-3300。對(duì)照品與對(duì)照藥材芍藥苷對(duì)照品；白芍對(duì)照藥材，均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。白芍藥材經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院藥用植物學(xué)科組鑒定符合XX年版《中國(guó)藥

5、典》白芍項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純?！　?方法與結(jié)果.1色譜條件色譜柱為HypersilC18柱；流動(dòng)相為A：乙腈；B：%磷酸水；柱溫25℃。線性梯度見表1。表1梯度洗脫.2檢測(cè)波長(zhǎng)確定取樣品溶液，分別在210，230，254，27nm處檢測(cè)。結(jié)果表明，254，27nm處各色譜峰之間分離度好，但峰數(shù)少；210nm檢測(cè)，峰數(shù)與230nm檢測(cè)基本一致，但基線不穩(wěn)定，不能準(zhǔn)確積分；以230nm檢測(cè)，峰數(shù)多，基線平穩(wěn)，故選之。.3提取方法的考察本實(shí)驗(yàn)對(duì)甲醇、95%乙醇索氏提取，甲醇、50%乙醇回流提取，甲醇、95%乙醇超聲提取，對(duì)

6、提取溶劑、提取方法進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，95%乙醇超聲提取4min后,所得色譜峰的峰數(shù)為最多。后又對(duì)50%，75%，95%乙醇超聲提取進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)三者之間峰數(shù)無顯著性變化，本文采用50%乙醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提取。.4對(duì)照藥材和供試品溶液的制備精密稱取對(duì)照藥材和樣品干燥粉末各g，分置50ml量瓶中，精密加入50%乙醇50ml，稱定重量，超聲提取4min，冷卻，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液1ml，用流動(dòng)相）稀釋至10ml，搖勻，過μm濾膜，各取續(xù)濾液作為對(duì)照藥材溶液和供試品溶液。.5對(duì)照品溶液制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品

7、適量，加50%乙醇制成每毫升含80μg的溶液，即得。.6色譜條件的確立根據(jù)上述結(jié)果，最終確立的色譜條件為：色譜柱：HypersilC18柱流動(dòng)相：乙腈-%磷酸水，梯度見表1；檢測(cè)UV30nm；流速ml/min；柱溫:25℃。在上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液和樣品溶液各進(jìn)樣10μl進(jìn)行HPLC-FP測(cè)定，結(jié)果對(duì)照藥材與樣品中的各個(gè)峰分離較好，對(duì)照品芍藥苷峰與樣品中芍藥苷峰保留時(shí)間一致，并且與樣品中其它組分達(dá)到了很好的分離。.7精密度實(shí)驗(yàn)精密稱取12號(hào)樣品，按供試品溶液制備方法操作，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄其指紋圖譜。用國(guó)家藥典委員會(huì)推薦的“中藥色

8、譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的操作規(guī)范”軟件(版本00A)處理數(shù)據(jù)，結(jié)果表明，各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和其相對(duì)峰面