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《淺析低氧促進體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞內(nèi)β》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、淺析低氧促進體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞內(nèi)β【摘要】目的探討低氧對星形膠質(zhì)細胞內(nèi)β-catenin積聚的機制。方法體外分離昆明小鼠海馬星形膠質(zhì)細胞，分別置于常氧和低氧條件下培養(yǎng)12h和24h后，利用RT-PCR和Westernblot法檢測星形膠質(zhì)細胞內(nèi)Wnt通路相關蛋白Wnt3、Wnt3a及磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI3K/Akt)通路中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)蛋白的表達情況。結(jié)果常氧培養(yǎng)的海馬星形膠質(zhì)細胞內(nèi)存在Wnt3的表達，低氧對海馬星形膠質(zhì)細胞內(nèi)Wnt3的表達
2、無影響(P>);常氧和低氧培養(yǎng)的海馬星形膠質(zhì)細胞內(nèi)均不存在Wnt3a表達;低氧增加海馬星形膠質(zhì)細胞的p-Akt和p-GSK-3β蛋白水平(P【關鍵詞】低氧;星形膠質(zhì)細胞;Wnt;β-catenin;Akt;GSK-3βABSTRACT:ObjectiveToexplorethemechanismofhypoxia-promotedaccumulationofβ-catenininwereisolated,culturedandidentifiedfromKunmingmousehippocampusinvitro,
3、thenculturedinhypoxiaandtraditionaloxygenforhoursand1hours,respectively.TheexpressionsofWntandWnt3ainhippocampusastrocytesweredetectedbyRT-PCR.TheeffectofhypoxiaontheexpressionsofWntandWnt3ainhippocampusastrocyteswasanalyzedbyRT-PCR.Theinfluenceofhypoxiaonthee
4、xpressionsofphosphorylatedAktandglycogensynthasekinase-3β(GKS-3β)protEinwasanalyzedbyWesternexpressedinhippocampusastrocytesandhypoxiadidnotaffectitsexpression(P>).Wnt3awasnotdetectedinhippocampusastrocytesintraditionalcultureorhypoxicculturecondition.Hypoxiap
5、romotedthelevelofphosphorylatedAktandGKS-3βprotEIn(PKEYWORDS:hypoxia;astrocyte;Wnt;β-catenin;Akt;glycogensynthasekinase-3β(GSK-3β)低氧預適應是指輕度低氧和短暫缺血的重復預處理觸發(fā)和動員機體內(nèi)在的防護能力，從而對隨后的嚴重低氧或缺血損傷產(chǎn)生強大的防御和保護作用[1]。在整體動物腦缺血預適應中，星形膠質(zhì)細胞可能釋放多種因子，作用于神經(jīng)元[2-3]，但其具體的作用機制尚不清楚。研究表明，在低氧
6、預處理后離體及在體動物均發(fā)生反應性星形膠質(zhì)細胞增生，其作用可能與β-catenin的過度激活有關[4-5]。我們在前期工作中亦發(fā)現(xiàn)，β-catenin可促進(30±20)mL/L低氧條件下體外培養(yǎng)的神經(jīng)前體細胞和膠質(zhì)前體細胞增殖，并可在低氧培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞中積聚[6]，但其作用機制尚未明確。本實驗選用海馬星形膠質(zhì)細胞，探討低氧培養(yǎng)條件下，星形膠質(zhì)細胞內(nèi)β-catenin積聚的可能機制。1材料與方法材料DMEM/F12、胎牛血清(FBS)購自Hyclone公司，兔抗膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glialfibrillary
7、acidicprotein,GFAP)多抗購自Sigma公司，羊抗β-catenin抗體、兔抗β-actin抗體、抗磷酸化Ser9位點GSK-3β單克隆抗體、抗磷酸化Ser473位點Akt單克隆抗體(SantaCruz)、辣根過氧化物酶標記兔抗山羊IgG、辣根過氧化物酶標記山羊抗兔IgG購自SantaCruz公司，SuperSignalWestPico化學發(fā)光檢測底物試劑盒購自Pierce公司，RT-PCR試劑盒、Trizol購自Invitrogen公司，SP免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒購自北京中杉公司，新生昆
8、明小鼠由南京軍區(qū)福州總醫(yī)院比較醫(yī)學科提供，SPF級。方法昆明小鼠海馬星形膠質(zhì)細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定選用2d齡小鼠，750mL/L乙醇浸泡消毒后迅速斷頭取腦，置于盛有D-Hanks液的玻璃培養(yǎng)皿中，用眼科剪剪去頭部皮膚和顱骨，仔細去除腦膜和血管，剝離出大腦半球，用D-Hanks液清洗2次;在解剖顯微鏡下小心分離海馬組織，置于另一盛有D-Hanks液的培養(yǎng)
